川贝母生物碱检测方法建立及提取工艺的研究
川贝母（FritillariacirrhosaD.Don）为百合科植物，是我国传统的名贵中药材。分布于青藏高原和川西高原地区。川贝母不仅具有悠久的应用历史，也是一种药用价值较高的传统中药材。本课题主要以川贝母中生物碱为研究对象，采用高效液相色谱串联四极杆质谱联用技术对其进行检测；在单因素实验的基础上采用Box-Behnken响应面法对川贝母中生物碱提取工艺进行优化；通过中药系统药理学分析平台（TCMSP，https://tcmspw.com/tcmspsearch.php）、靶点GO富集分析、靶点KEGGPathway富集分析以及靶点PPI分析等这些分析手段，更近一步的分析川贝母中生物碱与炎症通路相关的分子机制。主要研究结果如下： （1）采用UPLC-MS/MS法测定采自青海果洛州班玛县川贝母中的四种生物碱成分，贝母素乙、贝母素甲、西贝母碱、贝母辛，对其进行了方法学考察。系统适用性的实验结果表明，标准对照品中间点溶液四种生物碱面积相对标准偏差均小于5%，符合方法验证评价标准；专属性结果表明，四种生物碱色谱峰形良好，且空白中没有干扰峰，符合方法验证评价标准；综合考虑四种生物碱的回收率，所以本研究中将西贝母碱、贝母素甲、贝母素乙、贝母辛的检出限定义为0.0025μg/g（计算公式为0.001μg/mL×5mL/2g），定量限为0.0075μg/g（计算公式为3倍检出限）；四种生物碱线性关系良好，相关系数R2均大于0.99，符合方法验证评价标准；平行制备6份样品，上机测试，四种生物碱含量测定的重复性良好，测定结果RSD均小于10%，符合方法验证评价标准；四种生物碱含量测定准确度良好，回收率在71%-114%之间，相对标准偏差均小于10%，表明该方法回收率良好，符合方法验证评价标准；标准品溶液和样品溶液分别放置0h、1h、3h、6h、12h后对其测定，结果表明，相对标准偏差为10%，符合方法验证评价标准。 （2）在川贝母生物碱提取方法的对比中，以提取的四种活性成分生物碱得率为指标，对比加热回流法、渗漉法、超声波法、浸渍法，结果表明加热回流提取的效果最佳。然后运用响应面法优化加热回流提取川贝母中生物碱的最佳提取工艺，结果表明：提取温度55℃、提取溶剂比例4:1、提取时间50min、料液比:1:40，在此条件下，川贝母中生物碱的得率为0.18%。验证实验表明，该工艺稳定可行。 （3）运用网络药理学的方法，对川贝母中的生物碱PeimineVerticine、Impericine、Ebeiedinone、Peimisine、IsoverticineKorseveriline、Korseverinine、Delavinone、Solanidine、Ebeiedineverticinone、ImperialineSipeimine进行炎症相关的分析，最终得到了活性生物碱、靶点以及PI3—Atsignalingpathway、Insulinresistance、Non—smallcelllungcancer、InfluenzaA、Tuberculosis等这些通路和炎症的Network图，分析出了它们之间的相互作用及作用机制。
川贝母;提取工艺;生物碱;制备工艺;网络药理学
青海师范大学
硕士
植物学
陈志
2021
中文
R284.2
2021-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）