药用野生稻成熟胚再生体系的建立及遗传转化体系的初探
药用野生稻（Oryzaofficinalis）蕴藏着许多栽培稻不具有或已经丢失的优良性状和宝贵基因，包括高产、抗病、抗虫、高光效潜能等。选择性地将这些有利基因从药用野生稻转入栽培稻品种中是水稻育种者的重要目标。然而药用野生稻的基因型为CC型，与栽培稻之间杂交十分困难。构建突变体库是挖掘和利用药用野生稻功能基因最直接有效的手段之一，但是T-DNA插入突变体库的构建依赖于高效的遗传转化体系。对于药用野生稻而言，其再生体系的建立十分困难，转化体系尚未见报道。本研究利用药用野生稻成熟胚为材料，拟建立药用野生稻再生体系，并对其转化体系进行初步探究。主要研究结果如下： （1）药用野生稻愈伤组织诱导条件的优化。通过比较9组2,4-D浓度，5种不同的愈伤组织诱导培养基，2种不同的外植体消毒方式，找到适合药用野生稻成熟胚愈伤组织诱导的条件：愈伤组织诱导适宜的2,4-D浓度为5mg/L，愈伤组织平均诱导率为55%；较为适合药用野生稻愈伤组织诱导的培养基为NB和NMB，培养基中的额外添加物为0.5g/LGln、0.5g/LPro、0.3g/LCA、2.8g/Lphytagel和30g/L蔗糖；与用75%酒精消毒相比，药用野生稻最佳的外植体消毒方式为0.6%TCCA溶液浸泡种子3.5h后再用0.1%氯化汞消毒8min，这种消毒方式更利于芽的生长和愈伤组织的形成。 （2）药用野生稻再生体系的建立。由诱导得到的愈伤组织经过2~3次继代才能得到胚性愈伤组织，而在低浓度2,4-D（1~2mg/L）继代下，胚性愈伤组织形成率更高；适合药用野生稻愈伤组织继代的培养基为NB、NMB和N6；前2次分化的培养基为：NB+3mg/L6-BA+3mg/LZT+0.25mg/LNAA+10μMCu2++30g/L蔗糖，后续的分化培养基选用NMB+2mg/L6-BA+2mg/LZT+0.25mg/LNAA+10μMCu2++30g/L蔗糖。生根培养基为：1/2NB+10g/L蔗糖+3.5g/Lphytagel。 （3）药用野生稻转化体系初探。以继代得到的药用野生稻胚性愈伤组织为转化受体，经浓度OD600为0.4的含pFX-E24.2-15R载体的农杆菌侵染30min后，22℃黑暗条件下共培养36h，使用添加了0.4g/LCef为抑菌剂、15mg/LHyg为筛选剂的选择培养基进行筛选，得到抗性愈伤组织后进行分化、生根，成功获得转化苗。转化苗有待通过GUS染色初步鉴定转基因阳性植株。
药用野生稻;愈伤组织诱导;再生体系;遗传转化
浙江师范大学
硕士
植物学
杨玲;张维林
2021
中文
S665.4
2021-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）