GLP-1受体激动剂利拉鲁肽减轻棕榈酸诱导L6细胞脂质沉积的机制研究
目的： 探索胰高血糖素样肽1（GLP-1）类似物利拉鲁肽（LR）对棕榈酸（PA）孵育的大鼠成肌细胞（L6）脂质沉积和胰岛素抵抗的影响及机制的探讨。 方法： 传代培养L6细胞系，经诱导分化后将细胞分为5组，即对照组、高脂组、10nmol/L利拉鲁肽组（10LR）、100nmol/L利拉鲁肽组（100LR）及1000nmol/L利拉鲁肽组（1000LR）。对照组是不加干预因素的空白组。高脂组将终浓度为0.6mmol/L的PA溶于培养基中，LR干预组使用高脂组培养基加不同浓度的LR（10、100和1000nmol/L）持续24小时。干预结束后，CCK-8法检测细胞活力，GPO-PAP酶法检测细胞内甘油三酸酯（TG）以确定细胞内脂质含量，RT-PCR和Westernblot方法检测细胞内脂肪酸转运蛋白（FAT/CD36），脂肪酸结合蛋白4（FABP4），葡萄糖调节蛋白78（GRP78），葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）mRNA和蛋白表达。油红O染色后，在显微镜下观察脂滴的形成。单因素方差分析用于各组数据之间的统计分析。 结果： 1各组细胞活性的比较 经0.6mmol/L棕榈酸（PA）干预24小时后，与对照组相比，高脂组的细胞活性明显降低（2.70±0.08vs2.17±0.06，t=9.33，Plt;0.01）。与高脂组相比，10LR组对细胞活力的影响无统计学意义（P＞0.05）。100LR组和1000LR组均可提高细胞活力（2.17±0.07vs2.64±0.10、2.50±0.07，均Plt;0.01）。与浓度1000nmol/L的LR相比较，浓度为100nmol/L的利拉鲁肽组在改善高脂诱导的L6细胞活性降低方面具有最佳效果（2.50±0.07vs2.64±0.10，Plt;0.05）。 2各组细胞TG含量比较 与对照组相比，高脂组中L6细胞的TG含量增加，差异有统计学意义（0.04±0.01vs0.13±0.02，Plt;0.01），与高脂组相比，10LR组的TG含量无明显差异（0.13±0.02vs0.13±0.01，P＞0.05），100LR、1000LR组均能有效降低细胞TG含量（分别为0.13±0.02vs0.09±0.01、0.06±0.02，均Plt;0.01）。 3各组细胞光镜结果 各组细胞用油红O染色后，除对照组外，脂质沉积的程度有所不同。对照组细胞器结构完整，肌管排列整齐，无脂质沉积。在高脂组中，细胞核移至细胞边缘，肌管结构紊乱，大量脂质沉积在细胞中。在LR处理组中，10nmol/L的LR处理的细胞中发现较多的脂质沉积；100nmol/L的LR处理组的L6细胞中可见少量脂质沉积；1000nmol/L的LR处理组中L6细胞结构完整，脂质沉积最少。 4各组细胞GRP78、FAT/CD36、FABP4、GLUT4的mRNA表达水平比较 与对照组相比，高脂组中GRP78mRNA，FAT/CD36mRNA和FABP4mRNA的表达水平明显升高，而GLUT4mRNA的表达水平降低，差异有统计学意义（Plt;0.01）。与高脂组比较，10LR组中FAT/CD36mRNA、GRP78mRNA水平下降，GLUT4mRNA水平升高，差异有统计学意义（P＜0.01）;100LR、1000LR两组细胞中GRP78mRNA、FAT/CD36mRNA、FABP4mRNA水平下降、GLUT4的mRNA水平升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。 5各组细胞GRP78、FAT/CD36、FABP4、GLUT4的蛋白表达水平比较 与对照组相比，高脂组细胞中GRP78，FAT/CD36和FABP4的蛋白表达水平明显高于对照组（Plt;0.01），而GLUT4的蛋白表达水平明显低于对照组，差异有统计学意义（Plt;0.01）；利拉鲁肽干预后，10LR组FAT/CD36和GRP78的蛋白表达下降，而GLUT4的蛋白表达增加（Plt;0.01）;100LR、1000LR两组细胞中GRP78蛋白、FAT/CD36蛋白、FABP4蛋白表达均明显下降、GLUT4的蛋白表达水平明显升高，差异有统计学意义（Plt;0.01）。 6相关分析研究结果 L6细胞TG与GRP78蛋白、FAT/CD36蛋白及FABP4蛋白表达量呈正相关（r=0.975、0.872、0.975，P=0.002、0.027、0.002），与GLUT4蛋白表达负相关（r=-0.872，P=0.027）。 结论： 1高脂孵育可使L6细胞出现脂质沉积。利拉鲁肽以浓度依赖的方式改善高脂培养L6细胞中的脂质沉积。 2利拉鲁肽呈浓度依赖性改变GRP78、FAT/CD36、FABP4、GLUT4的mRNA和蛋白表达，这可能与利拉鲁肽缓解大鼠成肌细胞内质网应激，减少细胞内脂质沉积，促进细胞对葡萄糖进行摄取、改善胰岛素抵抗的作用相关。
成肌细胞;利拉鲁肽;脂肪酸转运;内质网应激;胰岛素抵抗
承德医学院
硕士
内分泌与代谢
高宇
2021
中文
R329.2
2021-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）