不同生理状态下大鼠灌胃黄芩苷镁的药动学和组织分布研究
肝脏是参与人体代谢的重要器官，同时肝脏疾病也是导致死亡的主要疾病。中药黄芩为唇形科植物黄芩（scutellariabaicalensisgeorgi）的干燥根，具有良好的肝脏保护作用，还可以显著抑制大鼠肝脏的纤维化和脂质过氧化，传统用法为水煎煮。黄芩苷是从中药黄芩中提取出的一种具有清除自由基、抗氧化、抗炎等多种药理作用的黄酮类化合物，其对四氯化碳（CCl4）所致急性肝损伤也有保护作用，能明显改善CCl4诱导的慢性肝纤维化，是一种有潜力的抗肝纤维化药物，但其难溶于水。课题组前期研究制得了水溶性的黄芩苷镁，证实黄芩苷镁是黄芩苷在中药黄芩中的原本存在形式，故黄芩苷镁更能代表黄芩药材的药理作用。同时对其药效学研究表明，大鼠尾静脉注射黄芩苷镁和黄芩苷，黄芩苷镁对CCl4诱导的大鼠肝损伤有更好的保护作用。由于口服给药患者的顺应性更好，相较于注射剂更易于被临床接受。所以，课题组拟进行具有保肝作用的黄芩苷镁口服系统的开发。目前课题组已经完成了灌胃黄芩苷镁在正常大鼠体内的药物动力学研究。跟踪文献发现生理和病理的变化会影响药物的吸收、分布、代谢和排泄，使其药物动力学参数表现出显著差异。而且机体在生理病理状态下的药动学参数和组织分布特征与药物的临床应用更为相关。因此，本研究主要探究不同生理状态对大鼠灌胃黄芩苷镁药动学和组织分布的影响。 目的： 建立一种可靠、准确的同时测定大鼠血浆和组织中黄芩苷镁和黄芩素的高效液相色谱（HPLC）检测方法；揭示食物对黄芩苷镁在大鼠体内药动学行为的影响作用以及肝损伤对于其药动学和组织分布特征的影响作用；丰富黄芩苷镁的药物动力学研究内容；同时为黄芩苷镁口服给药系统的合理设计和临床应用提供实验依据和理论基础。 方法： 1.采用HPLC建立同时测定大鼠血浆和组织中黄芩苷镁和黄芩素浓度的体内分析方法。 2.健康SD大鼠，12只，随机分为禁食和未禁食组，每组6只。按照剂量287.31mg/kg，灌胃给予黄芩苷镁水溶液，分别在预定时间点取血。HPLC法测定不同时间点大鼠血浆中的黄芩苷镁和黄芩素的浓度，DAS3.0药动学软件计算药动学参数。 3.健康SD大鼠，12只，随机分为正常组和模型组，每组6只。模型组在给药前20h腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液诱导急性肝损伤，正常组腹腔注射同等体积的橄榄油作为对照。按照剂量287.31mg/kg，灌胃给予两组大鼠黄芩苷镁水溶液，取血。HPLC法测定不同时间点大鼠血浆中的黄芩苷镁和黄芩素的浓度，使用DAS3.0药动学软件计算药动学参数。 4.健康SD大鼠，72只，随机分为正常和模型组，每组6只。模型组在给药前20h腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液诱导急性肝损伤，正常组腹腔注射同等体积的橄榄油作为对照。按照剂量287.31mg/kg，灌胃给予两组大鼠黄芩苷镁水溶液，在预定时间点将大鼠麻醉，摘取大鼠肝、肺、肾、胃、脑、小肠组织。HPLC法测定不同时间点大鼠组织中的黄芩苷镁和黄芩素浓度，DAS3.0药动学软件计算黄芩苷镁和黄芩素在不同组织的主要药动学参数。 结果： 1.本论文建立的大鼠血浆和组织中黄芩苷镁和黄芩素的HPLC分析方法符合生物样品分析方法验证指导原则。该方法线性关系良好、精密度良好、专属性强、样品在试验条件下稳定、内源性物质不干扰测测定。 2.在禁食和未禁食状态下，大鼠灌胃给予黄芩苷镁（287.31mg/kg）水溶液后，血浆中几乎检测不到黄芩素。而黄芩苷镁的药时曲线均呈双峰，禁食组中黄芩苷镁达峰时间（Tmax）为0.167h；未禁食组中黄芩苷镁Tmax为8h。主要药动学参数达峰浓度（Cmax）分别为（6.390±1.661）mg/L和（2.937±1.271）mg/L；血药浓度-时间曲线下面积（AUC(0-t)）分别为（77.495±25.138）mg/L·h和（49.366±23.405）mg/L·h。禁食状态下，大鼠体内黄芩苷镁Cmax是未禁食状态下大鼠的2.18倍（P＜0.01），AUC(0-t)是其1.6倍（P＞0.05）。 3.在正常和肝损伤状态下，大鼠灌胃给予黄芩苷镁（287.31mg/kg）水溶液后，血浆中几乎检测不到黄芩素，黄芩苷镁的药时曲线均呈双峰。正常组中黄芩苷镁Tmax为0.167h；肝损伤模型组中黄芩苷镁Tmax为0.083h。黄芩苷镁的主要药动学参数：Cmax分别为（6.890±3.798）mg/L和（3.983±2.770）mg/L；AUC(0-t)分别为（96.567±34.475）mg/L·h和（48.82±12.915）mg/L·h；表观分布容积（Vz/F）分别为（25.925±19.054）L/kg和（60.255±23.692）L/kg。在肝损伤状态下，黄芩苷镁在大鼠血浆中的Cmax是正常状态的0.43倍（P＞0.05）；AUC(0-t)是正常状态的0.5倍（P＜0.05）；Vz/F是正常状态的2.3倍（P＜0.05）。 4.在正常组中，各组织中黄芩苷镁的AUC(0-t)从大到小的顺序为：小肠＞胃＞肾＞肺＞肝＞脑；黄芩素的AUC(0-t)从大到小的顺序为：小肠＞胃＞肾＞肝＞肺。在模型组中，各组织中黄芩苷镁的AUC(0-t)从大到小的顺序为：小肠＞胃＞肾＞肝＞肺＞脑；黄芩素的AUC(0-t)从大到小的顺序为：小肠＞胃＞肾＞肝＞肺。与正常组相比，模型组中肝、肺、肾、胃、脑、小肠中黄芩苷镁的AUC(0-t)和Cmax明显增加，在肝中的AUC(0-t)大于在肺中的AUC(0-t)；肝、肺、胃、小肠中黄芩素的AUC(0-t)和Cmax也明显增加，而肾中黄芩素的AUC(0-t)和Cmax略小于正常组。模型组的肺、胃、小肠组织中黄芩苷镁AUC(0-t)与黄芩素AUC(0-t)之比小于正常组，而肝和肾组织中黄芩苷镁AUC(0-t)与黄芩素AUC(0-t)之比大于正常组。 结论： 1.该实验建立的测定黄芩苷镁和黄芩素的体内分析方法专属性强、准确度高，可应用于黄芩苷镁在SD大鼠体内药动学和组织分布测定。 2.大鼠灌胃等剂量的黄芩苷镁后，禁食组大鼠和未禁食组大鼠体内黄芩苷镁的药时曲线均呈双峰，主要药动学参数AUC(0-t)和Cmax，存在明显差异，提示食物可影响黄芩苷镁在大鼠体内的药动学行为。 3.大鼠灌胃等剂量的黄芩苷镁后，正常组大鼠和肝损伤模型组大鼠体内黄芩苷镁的药时曲线均呈双峰，主要药动学参数AUC(0-t)、Cmax和Vz/F存在明显差异，提示肝损伤可影响黄芩苷镁在大鼠体内的药动学行为。 4.大鼠灌胃等剂量的黄芩苷镁后，在正常组和模型组大鼠体内的黄芩苷镁组织分布结果提示黄芩苷镁和黄芩素在肝、肺、肾、胃和小肠组织中存在生物转化，而且CCl4诱导的肝损伤不仅对黄芩苷镁的组织分布特征产生影响，还能够影响黄芩苷镁和黄芩素的体内转化。
黄芩苷镁;黄芩素;肝损伤;药物动力学;组织分布;动物模型
承德医学院
硕士
中药学
刘翠哲;常金花
2021
中文
R285.5
2021-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）