两种方法制备齐墩果酸纳米混悬剂及其药物动力学研究
齐墩果酸（oleanolicacid，OLA）是一种五环三萜类化合物，具有保肝、抗炎、抗癌等多种药理作用，可用于治疗病毒性肝炎、抑制肝癌的发展。OLA属于BCSⅣ类药物，口服生物利用度低，临床应用受到限制。纳米混悬剂（nanosuspension，NS）通过多种制备方法将难溶性药物减小至纳米尺寸，可不同程度地提高该药物经口服后在体内的生物利用度。本研究采用高压均质法和研磨法制备齐墩果酸纳米混悬剂（OLA-NS），以粒径和多分散系数（PDI）为指标筛选OLA-NS的最佳处方组成、优化制备及冻干工艺；通过多种手段进行物相表征，测定OLA原料药及OLA-NS在不同溶出介质中的累积溶出度，并考察两种OLA-NS的稳定性；分别灌胃给予大鼠OLA原料药和OLA-NS，比较药动学参数的组间差异，探讨两种制备方法对OLA体内外行为的影响，为OLA口服纳米制剂中制备方法的选择提供参考。 目的： 建立OLA含量、累积溶出度及在大鼠血浆中浓度的测定方法；采用高压均质法和研磨法制备OLA-NS，筛选最佳处方及工艺，并对其进行表征和体外溶出度的测定，考察OLA-NS稳定性的影响因素；对OLA原料药及两种方法制备的OLA-NS进行药动学研究。 方法： 1.建立HPLC法测定OLA含量及溶出度，并进行方法学考察。 2.分别采用高压均质法和研磨法制备OLA-NS，以粒径和PDI为指标筛选OLA-NS的最佳处方并优化制备工艺，通过比较两种OLA-NS冻干后的粒径变化及外观形态，确定冻干保护剂的种类及比例。 3.测定两种OLA-NS的Zeta电位，并利用透射电子显微镜（TEM）、差示扫描量热分析（DSC）、X-射线衍射（XRD）、傅里叶变换红外光谱（FT-IR）对OLA-NS进行表征；测定OLA原料药及OLA-NS在不同溶出介质中的累积溶出度，并对OLA-NS冻干粉进行影响因素考察。 4.建立UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中OLA浓度；将18只Wistar大鼠随机分为3组，分别灌胃给予OLA原料药和两种方法制备的OLA-NS，以甘草次酸为内标，测定血浆中OLA的浓度；计算相关参数，并比较组间的差异。 结果： 1.采用HPLC法测定OLA的含量，方法专属性强，在8.517~102.200μg/mL浓度范围内呈线性，回归方程为Y=5.1432X+3.5346（r=0.9992），回收率为97.21~102.51%，精密度、重复性、回收率、稳定性的RSD均小于2%，符合要求。HPLC测定OLA溶出度，方法专属性强，回归方程为Y=5.1716X+0.6794（r=0.9997），线性范围为2.044~40.880μg/mL，回收率为100.93~103.32%，精密度、重复性、回收率、稳定性的RSD均小于2%，符合要求。 2.以OLA-NS的粒径和PDI为评价指标，筛选稳定剂种类及比例，确定最佳处方组成为OLA:泊洛沙姆407（PLX-407）:十二烷基硫酸钠（SDS）=100:100:1。为使两种方法制备得到粒径相同、PDI较小的OLA-NS，研磨法考察研磨转速和时间、高压均质法考察均质压力及时间的影响，并优化制备工艺，最终确定高压均质法的制备工艺为：OLA原料药的质量浓度为3%，200bar、500bar、800bar、1000bar分别均质4min；研磨法的制备工艺为：OLA原料药的质量浓度为3%，粗混悬液和0.4~0.6mm氧化锆珠体积比1:1，正转（450r·min-1）3min-停2min-反转（450r·min-1）3min-停2min，研磨时间为120min。比较两种OLA-NS冻干后的粒径变化及外观形态，筛选冻干效果较为理想的保护剂种类及质量浓度，结果表明以2%麦芽糖+3%甘露醇为保护剂时，两种OLA-NS冻干粉的粒径相近且较小，约350nm。 3.研磨法制备的OLA-NS（OLA-NS-Y）和高压均质法制备的OLA-NS（OLA-NS-G）的Zeta电位分别为（-18.4±0.36）mV和（-21.11±0.45）mV。对OLA原料药、稳定剂、冻干保护剂和两种OLA-NS进行物相表征。TEM结果显示两种OLA-NS形态一致，均显示为棒状结晶，粒径约为300nm；DSC图谱显示两种OLA-NS的图谱一致，均存在OLA原料药、稳定剂PLX-407、冻干保护剂麦芽糖和甘露醇的熔点峰，但难以观察到SDS，可能是因为SDS浓度较低，冻干粉中OLA特征熔点峰的存在说明通过研磨法和高压均质法将OLA纳米化后并未改变其晶型；XRD结果显示，两种OLA-NS的XRD图谱中均可见OLA原料药及稳定剂、冻干保护剂的特征衍射峰，说明制成NS后OLA的晶型并未发生改变，仍以晶体形式存在；由FT-IR图谱可知，两种OLA-NS的FT-IR图谱基本一致，且OLA1691.66cm-1处的C=O和3458.97cm-1处的-OH特征峰均存在，说明并未发生相互作用。以上结果显示，OLA在两种OLA-NS中仍以晶型存在，高压均质法和研磨法并未改变OLA的晶体结构。体外溶出试验结果表明，以纯水为溶出介质时，0～15min时OLA-NS-Y冻干粉溶出较快，15min后OLA-NS-Y冻干粉的累积溶出度约为OLA-NS-G冻干粉的2～3倍；以0.5%SDS水溶液为溶出介质，在0～30min时OLA-NS-G的溶出速度较快，30min后OLA-NS-Y的累积溶出度略高，120min时累积溶出度均达到80%左右；以模拟肠液（FaSSIF-V2）为溶出介质时，OLA-NS-G在0～10min溶出较快，15min后趋于平稳，120min时的累积溶出度达到11.52%，约为OLA-NS-Y的1/2；OLA在纯水和FaSSIF-V2中几乎不溶。两种方法制备的OLA-NS可显著提高OLA原料药的溶出度，且OLA-NS-Y的溶出行为均优于OLA-NS-G。影响因素试验结果发现，高温和高湿条件下两种OLA-NS冻干粉均出现轻微结块，OLA-NS-Y冻干粉的溶出度在高温条件下变化较大，OLA-NS-Y冻干粉吸湿性较强，两种冻干粉的粒径及OLA-NS-Y冻干粉的PDI易受湿度影响；强光条件下两种OLA-NS冻干粉的外观、含量、溶出度、粒径及PDI等变化均较小，因此OLA-NS冻干粉在储存过程应着重注意避免较高温度和湿度，选择低温，干燥的贮存环境。 4.以甘草次酸为内标，建立了大鼠血浆中OLA浓度的UPLC-MS/MS分析方法，标准曲线方程为Y=1225.98310X+5597.33052（r=0.99980），线性范围为4.088~1635.200ng/mL，最低定量限为4.088ng/mL；低（10.220ng/mL）、中（204.400ng/mL）、高（1226.400ng/mL）浓度QC样品准确度在0.89%~7.33%之间；QC样品及甘草次酸的基质效应为91.30%~101.42%，提取回收率在93.89%~96.75%之间；精密度及稳定性RSD均小于8%，方法学考察均符合要求。药物动力学研究显示，将OLA制成NS可显著缩短达峰时间、提高达峰浓度，OLA-NS-G、OLA-NS-Y血药浓度均不同程度的高于OLA原料药，其相对生物利用度分别为338.43%和473.01%；统计学分析发现OLA-NS组与原料药组的多个参数均存在显著性差异（Plt;0.05）。 结论： 建立的HPLC和UPLC-MS/MS分析方法可用于样品中OLA的测定。采用高压均质法和研磨法制备的OLA-NS可显著提高OLA的溶出度和生物利用度，且OLA-NS-Y展现出更大的优势。
纳米混悬剂;齐墩果酸;高压均质法;研磨法;药物动力学
承德医学院
硕士
中药学
刘喜纲;常金花
2021
中文
R283.6
2021-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）