乙酰转移酶ARD1单抗的制备及ARD1与结肠癌关系的初步探讨
目的：制备乙酰转移酶ARD1单克隆抗体，用免疫组化方法检测ARD1蛋白在正常结肠组织、肠炎、良性腺瘤及结肠癌中的表达情况，以探讨乙酰转移酶ARD1与结肠癌转移的关系。
方法：利用PCR扩增从结肠癌细胞系HT-29中克隆ARD1全长cDNA。将上述cDNA定向克隆至原核表达载体pGEX-4T1并转化大肠杆菌BL-21（DE3），诱导融合蛋白GST-ARD1的表达并用Glutathione-Sepharose 4B进行纯化。用纯化的融合蛋白GST-ARD1皮下多点免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术制备抗ARD1的特异性单抗；采用ELISA和Western blotting方法鉴定其效价和特异性；以获得的ARD1特异单抗C7为一抗，免疫组化方法检测ARD1在正常结肠组织、肠炎、良性腺瘤及结肠癌中的表达情况，并对结果进行相应的统计学分析。
结果：获得只与ARD1特异反应的单抗3株（C7、3A9和5E3）；ELISA和Western bloting结果表明，单抗C7、5E3具有较高特异性和亲和力；免疫组化检测结果显示，ARD1蛋白在正常结肠组织、肠炎、良性腺瘤及其结肠癌中的表达率分别为2.1％（1/48）、0.0％（0/26）、8.3％（1/12）和83.0％（46/56）；结肠癌组织与正常及良性病变之间具有显著差异（P<0.001）。另外初步发现47对结肠癌与癌旁组织切片中结肠癌的阴性染色大多是中分化和低分化的，所有高分化肠癌组化染色都呈阳性，提示ARD1的出现可能参与结肠癌发生发展的早期事件。
结论：结肠癌癌组织中ARD1蛋白的表达显著高于癌旁正常组织及良性病变（结肠炎、良性腺瘤），且多见于高分化结肠癌，提示ARD1可能参与结肠癌早期事件，有可能作为结肠癌的诊断标记物。
乙酰转移酶;结肠癌;单克隆抗体;免疫组化
宁夏医科大学;宁夏医学院
硕士
遗传学
董泉洲;寿成超
2006
中文
R735.35;R730.231
59
2007-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）