FA-BSP-SA/TPGS胶束递药系统的构建及其负载酞菁锌与阿霉素协同抗肿瘤作用研究
本课题组前期已构建主动靶向pH敏感的FA-BSP-SA和TPGS混合胶束递药系统，研究中发现，加入TPGS可增强对乳腺癌4T1细胞的抑制作用。本研究结合体外质量评价参数(载药量、包封率、粒径等)、生物相容性和体外抗肿瘤实验综合评价，进一步探究FA-BSP-SA和TPGS作为递药系统最佳质量比例，并以阿霉素(Dox)和酞菁锌(ZnPc)为模型药物，考察二者协同抗肿瘤作用。本研究内容包括三部分：(1)首先合成了FA-BSP-SA和ZnPc，通过核磁共振氢谱对其进行表征，以芘为荧光物质测定FA-BSP-SA/TPGS的聚集行为。制备了FA-BSP-SA/TPGS胶束，Dox@FA-BSP-SA/TPGS胶束和ZnPc@FA-BSP-SA/TPGS胶束，并测定了粒径，Zeta电位，包封率和载药量。采用透析袋法对不同pH值和温度下游离药物和载药胶束的体外释药情况进行了研究。通过溶血性实验和MTT实验对胶束做了安全性评价。用MTT法测定了FA-BSP-SA/TPGS胶束，Dox@FA-BSP-SA/TPGS胶束和ZnPc@FA-BSP-SA/TPGS胶束对4T1细胞的体外抗肿瘤效果。综合以上实验结果，确定FA-BSP-SA和TPGS的最佳质量比例。(2)采用MTT法测定了载阿霉素胶束和载酞菁锌胶束体外协同抗肿瘤作用。通过荧光倒置显微镜对活性氧水平，线粒体膜电位，细胞凋亡及胞内摄取情况进行观察并拍照记录。(3)通过体内靶向分布实验观察并记录胶束在荷瘤BALB/c小鼠肿瘤部位及主要器官的分布情况，并对载药胶束的体内抗肿瘤效果做了研究。 TPGS质量比例为0%、15%、20%、25%和100%时的临界胶束聚集浓度分别为5.88、13.18、12.88、12.59和35.48μg/mL。采用静电吸附法对盐酸阿霉素进行疏水化处理后包载入胶束，所得载药胶束的载药量和包封率大于碱中和法疏水处理所得载药胶束。通过考察胶束粒径、Zeta电位、载药量、包封率、溶血率以及体外抗肿瘤实验，确定TPGS的最佳质量比例为25%。FA-BSP-SA/TPGS25胶束，Dox@FA-BSP-SA/TPGS25胶束和ZnPc@FA-BSP-SA/TPGS25胶束的粒径分别为110.2nm、107.9nm和114.47nm；Zeta电位分别为-18.9mV、-13.20mV和-20.63mV。Dox@FA-BSP-SA/TPGS25胶束的包封率和载药量分别为92.84%和7.24%，ZnPc@FA-BSP-SA/TPGS25胶束的包封率和载药量分别为26.48%和2.07%。胶束具有pH敏感性，随着pH值降低，粒径呈现增大趋势。体外释放实验表明，pH值对游离药物的释放速率无影响，而载药胶束的释药具有pH敏感性，随pH值降低释药速率加快，且温度越高释药速率越快。FA-BSP-SA/TPGS25胶束浓度为0.25mg/mL时溶血率为3.50%，表明FA-BSP-SA/TPGS25材料具有较好的生物相容性。细胞毒性实验表明FA-BSP-SA/TPGS25胶束浓度为50μg/mL时，HCM细胞存活率均仍在85%以上，进一步证明其生物相容性良好。体外抗肿瘤实验表明，FA-BSP-SA/TPGS25、Dox@FA-BSP-SA/TPGS25和ZnPc@FA-BSP-SA/TPGS25胶束抗肿瘤效果最好。综合上述实验结果，选择FA-BSP-SA/TPGS25胶束为载体做进一步研究。 体外协同抗肿瘤实验结果显示，Dox@FA-BSP-SA/TPGS25胶束和ZnPc@FA-BSP-SA/TPGS25胶束药物浓度分别为1.10和0.10μg/mL时，4T1细胞存活率为25%。进一步实验证明，TPGS，Dox和ZnPc可通过使癌细胞内线粒体膜电位降低，ROS水平升高，诱导癌细胞凋亡。 体内抗肿瘤实验表明，Dox@FA-BSP-SA/TPGS25+ZnPc@FA-BSP-SA/TPGS25胶束组通过化疗和光动力疗法协同治疗，表现出更强的肿瘤治疗效果。荷瘤BALB/c小鼠体内靶向分布实验结果表明，FA-BSP-SA/TPGS25胶束可以使药物更多的富集到肿瘤部位，减轻对其他器官组织的副作用，发挥更强的抗癌效果。 综上所述，FA-BSP-SA/TPGS25胶束可以将抗肿瘤药物靶向递送至肿瘤部位，增强抗肿瘤效果，故FA-BSP-SA/TPGS25胶束有望成为难溶性抗癌药物靶向递送的纳米载体材料。
抗肿瘤药物;酞菁锌;阿霉素;递药系统;靶向治疗
吉林大学
硕士
药剂学
管清香
2021
中文
R979.1
2021-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）