益生菌联合1,25(OH)2D3对肠道菌群及NAFLD形成的影响与机制的实验研究
目的： 利用MCD饮食构建大鼠NASH模型，从肠道菌群和免疫屏障角度出发，观察NASH形成过程中回肠组织VDR，抗菌肽Lysozyme和Defensinα4蛋白的表达以及肠道菌群变化，探究1,25(OH)2D3和益生菌植物乳酸杆菌（LP）对肠道菌群的影响及干预NAFLD的可能机制。 方法： 40只SPF级SD大鼠随机分为5组，Control（MCS）组、MCD组、1,25(OH)2D3组、LP组、1,25(OH)2D3+LP组。灌胃4周后采集大鼠粪便，门静脉血检测ALT、AST、TC、TG、HDL、LDL、TBA及LPS含量，同部位肝组织行H&E及ORO染色观察病理学改变；回肠末端行H&E染色，观察肠粘膜结构；IHC检测回肠VDR、Defensinα4的表达部位及含量；WB检测VDR、Defensinα4、Lysozyme蛋白表达量。16S rRNA基因测序检测肠道菌群结构变化。 结果： (1).MCD组肝组织发生脂肪变，脂质大量堆积，伴炎性细胞浸润；回肠黏膜明显变薄，绒毛结构严重破损，间隙增宽，大量上皮细胞呈碎片脱落，潘氏细胞体积较小、数量减少，各干预组均明显减轻。 (2).MCD组大鼠血清ALT、AST、TBA及LPS含量显著升高，各干预组明显下降(均P＜0.001)，且联合组ALT和AST降低最明显（P＜0.01）；MCD组血清TC、TG、HDL及LDL显著降低，各干预组TC、HDL及LDL明显升高(均P＜0.01)。 (3).IHC显示VDR、Defensinα4在MCD组回肠PC内表达下降，各干预组显著升高(均P＜0.05)，以联合组升高最明显（P＜0.05，P＞0.05）；WB发现MCD组VDR、Lysozyme和Defensinα4表达下降，各干预组显著升高(均P＜0.01)，联合组升高最显著（P＜0.05，P＜0.05，P＞0.05）。 (4).MCD组为拟杆菌肠型，MCS及各干预组为乳杆菌肠型。 (5).MCD组大鼠肠道菌群结构发生显著改变。MCD组厚壁菌门明显下降，拟杆菌门显著升高（均P＜0.01），各干预组厚壁菌门均升高（P＞0.05，P＜0.001，P＜0.05），拟杆菌门均降低（P＞0.05，P＜0.01，P＜0.05）。MCD组乳酸杆菌属明显下降，拟杆菌属、粪球菌属和普雷沃氏菌属明显升高（均P＜0.05），各干预组拟杆菌属明显下降（均P＜0.05），乳酸杆菌属升高（P＜0.05，P＞0.05，P＜0.01），粪球菌属下降（P＜0.01，P＞0.05，P＜0.001）、普雷沃氏菌属含量下降（P＞0.05）。 结论: 1.拟杆菌可能为NAFLD致病菌，植物乳酸杆菌可能通过降低拟杆菌水平缓解NAFLD程度。 2.1,25(OH)2D3和植物乳酸杆菌干预组菌群结构具有相似性，两者在提高乳酸杆菌水平方面具有协同作用。 3.1,25(OH)2D3、植物乳酸杆菌及两者联合干预减轻了MCD饮食诱导的大鼠肝脏脂质沉积及肠粘膜损伤，可能是通过上调回肠VDR及抗菌肽Lysozyme、Defensinα4表达，维持肠道免疫屏障及肠道菌群平衡这一通路实现的，且两者联合干预效果优于单一药物。
非酒精性脂肪性肝病;1,25-二羟维生素D3;植物乳酸杆菌;联合用药;肠道菌群
河北工程大学
硕士
临床医学
李校天
2021
中文
R575.5;R969
2021-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）