铝纳米颗粒肺粘膜疫苗佐剂-递送系统(VADS)有效诱导小鼠形成全身及粘膜免疫
呼吸道粘膜容易感染在空气中传播的病原体(例如SARS-CoV、MERS-CoV和禽流感病毒)，这些病原体有时会引发能够威胁生命的流行甚至大流行，这凸显了开发肺疫苗佐剂传递系统(VADS)的重要性。明矾作为最常见的疫苗佐剂可以有效增强特异性免疫反应，但应用于肺部接种可能会引起较为严重的炎症反应。因此在本文中，通过已建立的氧化铝纳米颗粒(ANs)肺部气管吸入的小鼠模型，将ANs装载卵清蛋白(OVA)模型抗原进行肺部接种来验证铝纳米载体激发强大而有效的粘膜免疫表达。 目的：考察氧化铝纳米粒用做肺部粘膜疫苗佐剂传递系统安全性及免疫诱导效力。 方法：采用动态光散射、电泳散射、扫描电镜以及透射电镜表征ANs粒径和形貌。采用考马斯亮蓝法测定体外ANs-OVA的抗原释放。体外细胞中，使用激光共聚焦显微镜(LSCM定性)和流式细胞仪(FACS定量)分析抗原呈递细胞(APC)摄取ANs的能力，并且考察了铝纳米载体药物对APC的成熟刺激以及APC的分子表达。体内实验中，通过小动物活体成像技术以及组织冰冻切片考察ANs进入体内后的分布及聚集情况，最后考察小鼠肺部接种不同免疫制剂后的免疫表达，同时与皮下接种传统磷酸铝佐剂进行比较。 结果：ANs粒径为25nm左右，电位为-30mV左右，形态为近球形。体外细胞实验也证明了与传统佐剂磷酸铝微粒相比，ANs可有效地促进APC的摄取。体内追踪表明ANs有效到达肺部并且在一定时间内游离到远端淋巴结部位，为发挥全身粘膜免疫提供初步的实验依据。在小鼠肺部免疫接种实验中，ANs不仅未产生过多的副作用，而且诱导了强烈的特异性免疫和广泛的粘膜免疫反应。酶联免疫吸附试验(ELISA)结果显示两次免疫接种后免疫小鼠在血清中产生高水平的IgG，小鼠的唾液、鼻粘膜灌洗液、支气管肺泡灌洗液(BALF)和阴道分泌物均产生高水平的IgA，而小肠冲洗液和粪便稀释液中并没有显现出免疫效果。此外，与传统铝佐剂相比，在接种ANs的免疫小鼠的血清和脾淋巴细胞的培养上清液中也检测到高水平的IgG2a和IFN-γ，表明肺部接种ANs可产生有效的平衡Th1/Th2免疫反应。 结论：这些结果表明，ANs-OVA通过肺部给药可诱导Th1/Th2免疫反应，并可诱导全身和粘膜免疫应答。因而，ANs有望成为有效的肺粘膜疫苗佐剂-递送系统(VADS)。
粘膜免疫;肺粘膜免疫;纳米氧化铝佐剂;疫苗佐剂传递系统
安徽医科大学
硕士
药剂学
王汀
2020
中文
R943
2021-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）