阿帕替尼逆转乳腺癌他莫昔芬耐药机制研究
目的探讨血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR, Vascular Endothelial Growth Factor Receptor)信号通路抑制剂阿帕替尼对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株LCC2的作用及其可能的作用机制。 方法1选取MCF-7、LCC2细胞系作为研究细胞,培养至对数期时观察亲本细胞株MCF-7与他莫昔芬耐药细胞株LCC2形态的区别；2选取不同浓度梯度的4-羟基-他莫昔芬作用于MCF-7及LCC2细胞48h，CCK-8法测定上述药物对两种细胞的增殖抑制率；CCK-8法检测阿帕替尼作用于耐药株细胞48h后细胞增殖抑制率的改变；选取不同浓度梯度4-羟基-他莫昔芬和10μM阿帕替尼联合作用于LCC2细胞48h，CCK-8法检测联合用药对细胞的增殖抑制率；34-羟基-他莫昔芬单药、阿帕替尼单药及两药联合作用于LCC2细胞48h后，使用流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)检测药物对细胞凋亡率的影响；4蛋白免疫印迹法(Western blot, WB)检测MCF-7细胞和LCC2细胞ERα、PI3K、Akt及p-Akt通路蛋白的表达差异，并检测4-羟基-他莫昔芬单药、阿帕替尼单药及两药联合干预LCC2细胞48h后，Bcl-2、Bax凋亡蛋白及ERα、PI3K、Akt及p-Akt蛋白量表达的改变。采用SPSS21.0软件进行统计学处理，计量资料采用?x±s表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，当P＜0.05时认为差异有统计学意义。 结果1MCF-7细胞与LCC2细胞形态有略微差别，敏感株细胞MCF-7呈长轴略短的梭形或多边形，耐药株细胞LCC2呈圆形或椭圆形；2CCK-8法显示同一时间相同浓度他莫昔芬作用于细胞，LCC2细胞抑制率小于MCF-7细胞抑制率(P＜0.05)；CCK-8法结果显示，阿帕替尼作用于LCC2细胞48h后，表现出了不同程度的细胞增殖抑制作用，细胞增殖抑制率随着阿帕替尼浓度的增加而增加；CCK-8检测不同浓度他莫昔芬与10μM阿帕替尼联合用药对比单药他莫昔芬作用于细胞，细胞增殖抑制率明显增加(P＜0.05)；3流式细胞术测细胞凋亡实验显示，与对照组相比实验组细胞凋亡率增加(P＜0.05)，且联合用药组凋亡率较他莫昔芬单药组增加(P＜0.01)；4蛋白免疫印迹法结果显示：耐药株与敏感株细胞相比ERα、PI3K、Akt及p-Akt蛋白量表达增加(P＜0.05)，4-羟基-他莫昔芬单药、阿帕替尼单药及两药联合作用于耐药株细胞48h后，联合用药组较单药组凋亡蛋白Bax蛋白表达升高、Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值下降(P＜0.01)；联合用药组较他莫昔芬单药组ERα、p-Akt蛋白表达、p-Akt/Akt比值下降(P＜0.01)。 结论通过4-羟基-他莫昔芬分别作用于耐药株和敏感株确定耐药差异，发现LCC2对4-羟基-他莫昔芬表现出了高度耐药性；阿帕替尼具有抑制乳腺癌耐药株细胞生长的作用，且具有量-效依赖关系；阿帕替尼与他莫昔芬联合使用，具有协同增强作用；阿帕替尼能抑制耐药株细胞的增殖能力，增强他莫昔芬敏感性，其机制可能与上调Bax蛋白，下调Bcl-2蛋白以及雌激素受体通路蛋白ERα表达及PI3K/Akt信号通路的活性有关，从而在一定程度上逆转了他莫昔芬耐药。
乳腺癌;内分泌治疗;他莫昔芬;阿帕替尼;雌激素受体
华北理工大学
硕士
肿瘤学
李庆霞
2020
中文
R737.9
2021-01-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）