白花丹醌对肝癌细胞发生上皮--间质转化的作用及其机制研究
目的：本课题以人肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC )细胞株(SMMC-7721 )为研究对象，研究白花丹醌对转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)诱导肝癌SMMC-7721细胞发生上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT )的影响，并探讨白花丹醌抗肝癌的作用机制。 方法：常规培养SMMC-7721细胞，用10ng/mLTGF-β1作用SMMC-7721细胞48h，制备人肝癌SMMC-7721细胞EMT模型，将实验分为空白组、10ng/mLTGF-β1组、白花丹醌低剂量组(2μmol/L)、白花丹醌中剂量组(4μmol/L)、白花丹醌高剂量组(8μmol/L)，共计5组。通过免疫荧光法检测上皮-间质转化标志物(E-cadherin, N-cadherin)的荧光强度；RT-PCR实验检测细胞上皮标志性蛋白E-cadherinmRNA,间质特征性蛋白N-cadherinmRNA,VimentinmRNA,SnaimRNA表达量水平；免疫印迹法(Western blot )检测细胞E-cadherin,N-cadherin,Vimentin,Snail蛋白表达水平；Westernblot检测各组细胞中PI3K,AKT,mTOR,p-PI3K,p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平。 结果：TGF-β1诱导后，SMMC-7721细胞由原来的不规则多边形变为长梭形，并伸出较多触角，上皮细胞标志蛋白E-cadherin荧光强度变弱，间质特征性蛋白N-cadherin荧光强度增加。westernblot结果显示：白花丹醌上调E-cadherin蛋白表达，下调N-cadherin,Vimentin,Snail蛋白表达；RT-PCR结果表明：白花丹醌上调E-cadherinmRNA表达，下调N-cadherinmRNA,VimentinmRNA,SnailmRNA表达；白花丹醌作用24h后，westernblot结果显示：白花丹醌高剂量组能显著下调PI3K,AKT,mTOR,p-PI3K,p-AKT,p-mTOR蛋白表达，在处理组加入PI-103抑制剂后，PI3K,AKT,mTOR,p-PI3K,p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平下调。 结论：1.白花丹醌有效抑制肝癌SMMC-7721细胞上皮-间质转化。2.白花丹醌能有效降低PI3K,AKT,mTOR,p-PI3K,p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平，作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mT0R信号通路有关。
肝癌;上皮-间质转化;白花丹醌
广西中医药大学
硕士
中西医结合基础
韦燕飞
2020
中文
R735.7
2020-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）