基于蛋白质组学的荔枝核总黄酮抗大鼠肝纤维化的机制研究
目的：观察荔枝核总黄酮(total flavone of Litchi chinensis Sonn，TFL)对体外HSC-T6细胞抗肝纤维化的作用机制的研究，为其进一步开发利用提供参考。 方法：利用荔枝核总黄酮、荔枝核总黄酮含药血清干预HSC-T614d后，提取细胞的蛋白，利用蛋白DDA建库和定量DIA技术筛选出表达的差异蛋白，并且利用GO数据库对差异蛋白进行富集分析和注释、Pathway数据库进行信号转导通路分析、蛋白互作分析、亚细胞定位；利用TCMSP数据库筛选TFL的有效成分，在STRING10.5数据库构建TFL化学成分靶点蛋白互作网络，通过GeneCards数据库获得TFL与肝纤维化相关靶点并对其进行生物信息学分析。 结果：质谱数据检索鉴定出荔枝核总黄酮组与模型对照组共有6011个差异蛋白，上调蛋白有168个，下调蛋白有203个。通过GO分析差异蛋白主要参与了结合、催化活性、分子功能调节剂、转录调节活性等10种分子功能，细胞组件主要存在于细胞内、细胞器、细胞外、细胞膜上主要参与细胞过程、代谢过程、生物调节、调节生物过程等27种生物过程；通过KEGG分析，发现其主要涉及代谢途径、补体和凝血级联、肿瘤中的转录失调、NF-κB(核转录因子-κB)信号通路、PPAR(过氧化物酶体增殖物激活受体)信号通路、HIF-1(缺氧诱导因子1)信号通路等30条信号通路；通过对差异蛋白亚细胞定位发现上调蛋白主要分布在细胞外、线粒体、过氧化物酶、内质网、细胞质溶胶-过氧化物酶中，下调蛋白主要分布在细胞核、细胞质溶胶、细胞质膜、细胞质溶胶-核中。从TFL中筛选得到2个活性成分：分别为表儿茶素和槲皮素，共有72个潜在作用靶点，经与肝纤维化相关发病机制靶点进行核查对比，得出TFL与肝纤维化相关发病机制的15个作用靶点基因，其中包括MMP2(基质金属蛋白酶)、CCL2(趋化因子CC亚家族)、TP53(肿瘤抑制蛋白)、HMOX1(血红素加氧酶1)、IFNG(干扰素γ基因)等。上述靶点主要分布在细胞间质、分泌颗粒、蛋白质细胞外基质中，且主要通过免疫反应、趋化因子生物合成过程的正调控、T细胞增殖的正调控、RNA聚合酶II启动子转录的正调控等分子功能来发挥对肝纤维化的治疗作用；上述靶点共涉及32条信号通路，其中基于目前研究显示与肝纤维化相关的信号通路有9条，分别为肿瘤信号通路、HIF-1信号通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用、TNF(肿瘤坏死因子)信号通路、癌症中的MicroRNA、PI3K-Akt信号通路、NOD(核苷酸结合寡聚化结构域)样受体信号通路、NF-κB信号通路、MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)信号通路。TFL治疗肝纤维化的“成分-靶点-通路”网络中IL1B(重组人白介素1beta)、IL6(白细胞介素6)、IFNG等基因是TFL有效成分治疗肝纤维化网络中的核心靶点(节点度值≥15，介数中心性＞0.8)；肿瘤信号通路、TNF信号通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用信号通路是TFL有效成分治疗肝纤维化核心作用通路(节点度值≥5，介数中心性＞0.001)。 结论：蛋白DDA建库和定量DIA能快速筛选出差异蛋白，结合GO分析、KEGG分析能够以整体观阐释TFL体外抗肝纤维化的作用机制；HMOX1、NQO1，ACACA、CDK1蛋白发生异常表达时，能起到抗肝纤维化的作用。由此可推测TFL抗肝纤维化的作用机制可能与这4个差异蛋白的表达有关，这4个蛋白有可能是TFL抗肝纤维化的靶点蛋白。
肝纤维化;荔枝核总黄酮;蛋白质组学;肝星形细胞
广西中医药大学
硕士
中西医结合基础
罗伟生
2020
中文
R575.2
2020-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）