基于16S rDNA分析黄连解毒汤对高脂饲养的SHR肠道菌群的影响
目的：通过16SrDNA测序技术观察高脂饲料饲养的自发性高血压大鼠肠道菌群的分布特征，探讨黄连解毒汤对该模型大鼠肠道菌群的影响，为中医药以肠道菌群为靶点防治高血压病提供理论依据。 方法：1.实验分组：将12周龄雄性SPF级WKY大鼠20只、SHR30只进行1周的适应性喂养，将WKY大鼠随机分为正常对照组(A组，n=10)和正常高脂组(B组，n=10)，分别采用普通饲料、高脂饲料喂养。将SHR随机分为高血压对照组(C组，n=10)和模型组20只，分别采用普通饲料、高脂饲料喂养。所有大鼠均连续饲养8周。8周结束后，模型组随机分为高血压高脂组(D组，n=10)和黄连解毒汤组(H组，n=10)，各大鼠饲料维持不变，H组另每日黄连解毒汤0.027g/kg/d灌胃给药1次，药物干预疗程为4周。 2.检测分析：每周采用无创血压测试仪测取各组大鼠收缩压。12周后，各组大鼠禁食、禁水8h，按3ml/kg腹腔注射10％水合氯醛进行麻醉，从盲肠前后端约2cm截取大鼠盲肠，取出盲肠内容物(新鲜粪便)，标记后放置60ml便盒中，立即在干冰中冷冻，然后转移至-80℃冰箱保存待用，委托上海美吉生物医药科技有限公司对样本(盲肠中的粪便)进行16SrDNA检测。Miseq测序得到的PEreads首先根据overlap关系进行拼接，同时对序列质量进行质控和过滤，区分样本后进行OTU聚类分析和物种分类学分析，并运用OTUVenn图、PCoA图进行展示。进一步分析各组间肠道菌群的门、纲、科、属水平的菌群差异和菌群结构变化，通过菌落Bar图和菌落Heatmap图进行展示。 结果：1.各组大鼠血压水平：实验前，同种类大鼠之间血压比较差异无统计学意义。在WKY大鼠中，与同期A组比较，B组在第8周和12周的血压均升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。在SHR中，与同期C组比较，D组、H组第8周血压均明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；12周时，D组血压显著高于C组和H组，差异有统计学意义(P＜0.05)。 2.SHR肠道菌群结构特征：与A组比较，C组的OTUs数目显著减少，PCoA分析中PC1维度和PC2维度均无显著差异。肠道菌群丰度显著下降，多样性无明显差异，菌群结构差异表现为厚壁菌、变形菌、放线菌、绿弯菌、乳酸杆菌等显著降低，瘤胃球菌、普雷沃菌氏菌等显著增加。 3.高脂饲料对WKY大鼠肠道菌群的影响：与A组比较，B组的OTUs数目减少，肠道菌群的丰度呈显著下降趋势，在PCoA分析中在PC1维度和PC2维度上均出现显著差异和聚类距离偏远。肠道菌群呈现厚壁菌、罗斯拜瑞氏菌、布拉提亚菌、梭状芽胞杆菌等丰度升高。拟杆菌、乳酸杆菌、普雷沃氏菌、瘤胃球菌等菌丰度降低。 4.高脂饲料对SHR肠道菌群的影响：与C组比较，D组的OTUs数目减少，肠道菌群的丰度呈显著下降趋势，在PCoA分析中在PC1维度和PC2维度上均出现显著差异和聚类距离偏远。肠道菌群呈现厚壁菌门、梭菌、毛螺菌、韦荣球菌、单毒丝菌、布拉提亚菌等丰度升高。拟杆菌、螺旋体菌、芽孢杆菌、拟杆菌、乳酸杆菌、普雷沃氏菌、瘤胃球菌等丰度降低。 5.黄连解毒汤对高脂饲养的SHR肠道菌群的影响：与D组比较，H组的OTUs数目增多，拟杆菌、杆菌、乳酸杆菌的丰度升高。厚壁菌、毛螺菌、巨单胞菌的丰度显著降低。 结论：1.SHR的肠道微生物丰度显著低于WKY大鼠，高血压状态下的肠道菌群处于紊乱状态。 2.高脂饲料可显著改变WKY大鼠肠道菌群结构，升高血压，其机制可能与乳酸杆菌等益生菌丰度明显减少，厚壁菌等条件致病菌丰度显著增加有关。 3.高脂饲料对SHR肠道菌群的影响与WKY大鼠相似，但肠道菌群的定植抗性受到破坏，特异性表现为螺旋体菌消失，出现新的菌种巨单胞菌。 4.黄连解毒汤可有效改善大鼠肠道菌群的紊乱，修复肠道定植抗性，增加菌群和益生菌的丰度，降低致病菌的丰度达到对抗高血压的作用。
自发性高血压;黄连解毒汤;16SrDNA;肠道菌群;高脂饲料
广西中医药大学
硕士
中西医结合临床
岳桂华
2020
中文
R544.1
2020-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）