盐酸左旋咪唑片中杂质的研究及其质量标准的提高
目的：采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用仪(UPLC-Q-TOF )，对盐酸左旋咪唑片中的杂质进行结构鉴定；利用ADMETPredictor8.5软件对杂质进行毒理性质参数做全面预测，分析杂质可能存在的不良反应的风险；采用反相高效液相色谱仪(RP-HPLC)测定盐酸左旋咪唑片的杂质含量，充分了解杂质的分布及来源情况；利用手性柱HPLC检查法，考察样品中右旋体杂质的含量，并分析其来源；通过样品的稳定性研究，评价包装和贮存条件的合理性；通过原辅料相容性研究，评价处方的合理性；采用反相高效液相色谱仪(RP-HPLC)对盐酸左旋咪唑片进行含量测定和溶出度测定，以进一步提高药品质量标准。 方法：(1)盐酸左旋咪唑片中杂质的结构及毒性分析：采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用仪(UPLC-Q-TOF)，在电喷雾离子源正离子模式下，采用C18色谱柱(2.1mm×150mm，2.7μm)，以50mmol/L乙酸铵溶液-乙腈(80:20)为流动相，流速为0.4ml/min,柱温：40℃。利用一级全扫描质谱得到各有关物质的精确相对分子质量和元素信息，再根据二级全扫描质谱获得碎片离子信息，最终对未知的杂质进行结构鉴定；再利用ADMETPredictor8.5根据杂质的结构特性进行毒理性质参数做全面预测。(2)盐酸左旋咪唑片中杂质含量的测定：采用反相高效液相色谱仪(RP-HPLC)，C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相A为0.5%磷酸二氢铵溶液(用三乙胺调节pH值至6.5)，流动相B为乙腈， 梯度洗脱，流速1ml/min；柱温：30℃；检测波长为215nm。(3)盐酸左旋咪唑片中右旋体杂质的测定：利用手性色谱柱HPLC法，以50mmol/L磷酸二氢钾-乙腈(75：25)为流动相，等度洗脱，流速1ml/min，检测波长214nm，柱温为40℃。(4)反相高效液相色谱法测定盐酸左旋咪唑片的含量：采用C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，以0.5%磷酸氢二铵溶液(用三乙胺调pH至6.5)-乙腈(80:20)为流动相，流速为1ml/min，检测波长为215nm，柱温为30℃。(5)依据药物制剂稳定性试验指导原则进行影响因素试验，将样品进行影响因素试验、加速试验和长期留样试验。通过考察样品中杂质和含量的变化情况，评价装和贮存条件的合理性。(6)通过将原料与辅料按一定的比例混合后考察杂质的变化情况，考察处方工艺和辅料对杂质的影响。(7)盐酸左旋咪唑片溶出度的测定：以水900ml作为溶出介质，转速为每分钟50转，经30分钟时取样进行HPLC测定。 结果：(1)共检测出14个杂质，并推测出14个杂质的分子结构；毒性风险预测结果：14个杂质均无心脏毒性和急性毒性，可能有肝脏毒性的有杂质A、C、D、1、2、4、5、6，可能有致癌毒性的有杂质4、5、6，可能有染色体变异毒性的有杂质C、D、1，可能有生殖毒性的有杂质C、D、E、1、2、3、5、6、8、9，可能有致突变风险的有杂质C、1。最终的毒性风险评估得出，风险最大的是杂质A、C、2、5和6。(2)通过HPLC法测定，杂质A、B、C、D、E在0.5～10μg/ml浓度范围内线性关系良好(r＞0.999)，各杂质与主峰均能得到有效的分离。杂质A、B、C、D、E平均加样回收率分别为99.2%、98.9%、98.4%、97.6%、97.9%。(3)通过手性色谱柱HPLC法测定，右旋体杂质在0.0946～4.7309μg/ml范围内线性关系良好(相关系数r=0.9997)，平均回收率为102.2%，检出限为0.013μg/ml。(4)通过HPLC法对盐酸左旋咪唑进行含量测定，结果盐酸左旋咪唑在20～500μg/ml浓度范围内线性关系良好(相关系数r=0.9996)，平均模拟回收率为99.5%，检出限为0.051μg/ml。(5)通过稳定性的影响因素试验发现，盐酸左旋咪唑片在强光照射下不稳定，对热比较敏感。(6)在盐酸左旋咪唑与二氧化硅的混合物中，杂质C明显增大，两者存在原辅料相容性问题。(7)建立了盐酸左旋咪唑片溶出度测定的HPLC法，24批次的样品溶出量均大于80%。 结论：本文新建立了盐酸左旋咪唑片中杂质的含量、右旋体杂质的含量、盐酸左旋咪唑的含量和溶出度的测定方法，并初步鉴定了14个杂质的化学结构.通过预测发现，大部分杂质均有毒性风险。二氧化硅与原料存在相容性问题，建议企业尽量避免使用。最终拟定出更适合现代分析方法学要求的，更为科学的盐酸左旋咪唑片质量标准，为提高盐酸左旋咪唑片质量提供了有利的科学理论依据。
盐酸左旋咪唑;高效液相色谱;杂质;质量标准
广西中医药大学
硕士
药物分析
侯小涛
2020
中文
R917
2020-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）