SS31对ARPE--19细胞线粒体功能及凋亡保护作用的研究
目的：初步探究线粒体靶向肽SS31对ARPE-19细胞的线粒体功能及凋亡的保护作用。 方法：用不同浓度的H2O2（0,100,150,200,250,300,500μmol/L）处理ARPE-19细胞24h,用MTT法检测细胞活性并选择最适浓度建立氧化损伤模型，再用不同浓度的SS31（10nM,100nM,1μmol/L）预处理细胞2h，通过MTT法测定细胞活力并选择SS31的最佳保护浓度。在倒置相差显微镜下观察ARPE-19细胞形态。在荧光显微镜下观察ARPE-19细胞DAPI染色结果。通过Annexin-V/PI染色，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。用MitoSOX red探针染色细胞，在荧光显微镜检测活性氧（ROS）的释放水平。用DCFH-DA探针和流式细胞仪检测ROS的释放水平。用JC-1荧光探针和流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化。用RT-PCR技术测定ARPE-19细胞凋亡相关基因（Bax,Caspase-3和Bcl-2）的表达水平，通过Real-time PCR技术测定这三种基因mRNA水平。使用单因素方差分析（ANOVA）方法，应用统计学软件SPSS19.0进行统计分析，P＜0.05有统计学差异。 结果：用不同浓度H2O2处理细胞后，ARPE-19细胞活性均降低并呈浓度依赖性。在各浓度SS31的预处理下，细胞活性均较H2O2组增高（P＜0.05）。单纯SS31作用后，细胞活性与空白组无明显差异。在倒置相差显微镜下观察细胞，随着H2O2浓度的增加，细胞数目逐渐减少，形态皱缩。随着SS31浓度的增加，细胞形态及数量趋于正常。在荧光显微镜下观察细胞DAPI染色，H2O2组可见强荧光点和细胞核碎片化，而SS31+H2O2组细胞的荧光弱于H2O2组。流式细胞仪检测凋亡结果表明，H2O2+SS31组与H2O2组相比，凋亡细胞比例降低（P＜0.05）。活性氧（ROS）检测结果表明H2O2组显示强荧光，H2O2+SS31组荧光较其相比明显减弱，表明SS31+H2O2组ROS释放水平低于H2O2组（P＜0.05）。线粒体膜电位监测结果表明，SS31+H2O2组低线粒体膜电位细胞比例较H2O2组降低。凋亡相关基因mRNA水平及表达水平的检测结果表明，SS31可以增加ARPE-19细胞在氧化损伤下Bcl-2基因的表达及mRNA水平，降低Bax以及Caspase-3基因的表达及mRNA水平（P＜0.05）。 结论：初步认为线粒体靶向肽SS31可以保护氧化损伤下ARPE-19细胞的线粒体功能和减少细胞凋亡。
视网膜上皮细胞;氧化损伤;线粒体靶向肽SS31;细胞保护
西安医学院
硕士
眼科学
何媛
2020
中文
R774.1
2020-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）