HIF--1α基因修饰的干细胞粘附胶原支架促进脑创伤后神经修复的研究
目的： 利用改良自由落体Feeney法构建SD大鼠外伤性颅脑损伤（Traumatic brain injury，TBI）模型，探讨HIF-1α基因修饰的脐带间充质干细胞（Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells，UCMSCs）与细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）复合体移植对大鼠脑创伤后神经修复的影响。 方法： 将HIF-1α基因转染UCMSCs，通过Western Blot鉴定HIF-1α基因在UCMSCs中的表达；采用化学提取法取得的ECM，通过苏木精-伊红（Hematoxylin–Eosin，HE）染色鉴定细胞去除情况，免疫组化染色证明胶原蛋白保留情况；选取30只体重在220-260g SD雄性大鼠，通过Feeney法建立大鼠中度TBI模型，随机分为5组（各组6只）：A组脑创伤区移植生理盐水，B组脑创伤区移植UCMSCs，C组脑创伤区移植ECM，D组脑创伤区移植HIF-1α基因修饰的UCMSCs，E组脑创伤区移植HIF-1α基因修饰的UCMSCs与脱细胞脑支架复合体，术后1天进行移植，分别在脑创伤后1天、脑创伤后7天、脑创伤后14天和脑创伤后28天对不同实验组大鼠进行改良的神经功能缺损评分（mNSS，modified Neurological Severity Scores），并鉴定环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB，cAMP-response element binding protein）基因表达。 结果： 组织块培养法获取UCMSCs，形态学观察呈纤维样细胞。免疫荧光检测细胞表型CD105阳性，符合MSCs表面标记；Western Blot证实采用脂质体Lipofectamine2000转染的UCMSCs中，HIF-1α蛋白表达明显增加；采取化学提取法取得的脱细胞凝胶支架经苏木精-伊红染色证实细胞明显去除，免疫组化证实胶原蛋白得到保留；在细胞移植治疗大鼠TBI模型2周开始，HIF-1α-UCMSCs组行为学评分均比对照组行为学评分明显降低（P<0.05）；UCMSCs组、ECM组与生理盐水组相比CREB蛋白表达明显增多（P<0.05）；HIF-1α-UCMSCs组与UCMSCs组相比CREB蛋白表达明显增多（P<0.05）；HIF-1α-UCMSCs+ECM组与UCMSCs组、ECM组、HIF-1α-UCMSCs组相比CREB蛋白表达明显增多（P<0.05）。 结论： 对于中度TBI损伤大鼠单一的UCMSCs、ECM、HIF-1α-UCMSCs都可以不同程度的修复TBI后神经损伤；而将UCMSCs、HIF-1α，ECM三者结合到一起治疗比单一治疗效果更显著。
外伤性颅脑损伤;胶原支架;缺氧诱导因子-1α;脐带间充质干细胞;细胞外基质;神经修复
西安医学院
硕士
外科学
张越林
2020
中文
R651.150.8
2020-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）