线粒体靶向肽SS31对H2O2诱导661W细胞程序性坏死的保护作用
目的：探讨线粒体靶向肽SS31能否通过调控程序性坏死对抗H2O2引起的661W细胞损伤。 方法：选择400μmol·L-1H2O2构建氧化应激损伤模型；根据MTT结果筛选出100nmol·L-1SS31、50μmol·L-1Nec-1作为实验最佳浓度。按661W细胞处理方式的不同，细胞分为空白组、H2O2组、SS31+H2O2组、SS31+Nec-1+H2O2组、Nec-1+H2O2组，用MTT法及LDH法检测细胞活性并在倒置相差显微镜下观察各组细胞的形态结构变化；分别用双氯荧光素（DCFH-DA）染色和MitoSOX红色荧光染色分别在流式和荧光显微镜下检测各组活细胞线粒体中产生细胞活性氧簇（ROS）情况；用微量丙二醇（MDA）试剂盒检测测定氧化应激程度；JC-1染色测定线粒体膜电位；AnnexinV/PI双染检测细胞PI阳性率；用DAPI/PI染色双染在荧光显微镜观察细胞膜通透性变化；并应用Western blot法检测661W细胞反映程序性坏死的RIP3蛋白的水平。 结果：与对照组相比，H2O2组细胞存活率明显降低（P＜0.05），SS31+Nec-1组、SS31+H2O2组、SS31+Nec-1+H2O2组、Nec-1+H2O2组细胞存活率均高于H2O2组，差异有统计学意义（P＜0.05）。荧光显微镜下MitoSOXTM染色结果显示，与H2O2组相比，SS31+H2O2组、SS31+Nec-1+H2O2组、Nec-1+H2O2组红色荧光明显减弱，流式细胞仪结果也进一步证实，SS31+H2O2组、SS31+Nec-1+H2O2组、Nec-1+H2O2组均能减少细胞内ROS量；SS31+H2O2组、SS31+Nec-1+H2O2组、Nec-1+H2O2组MDA水平均较H2O2组降低（P＜0.05）；与H2O2组相比，SS31+H2O2组、SS31+Nec-1+H2O2组、Nec-1+H2O2组线粒体膜电位细胞比例下降率升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；AnnexinV/PI双染结果显示：与对照组相比，H2O2组PI阳性率增加；与H2O2组相比，SS31+H2O2组、SS31+Nec-1+H2O2组、Nec-1+H2O2组PI阳性率明显降低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）；Western blot检测结果显示，H2O2处理ARPE-19细胞9小时后，RIP3蛋白的表达开始升高，24小时RIP3蛋白表达水平最高（P＜0.05）。与对照组相比，H2O2组RIP3蛋白表达水平明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05），与H2O2组相比，SS31+H2O2组、SS31+Nec-1+H2O2组、Nec-1+H2O2组RIP3蛋白表达上调作用显著减弱，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。 结论：线粒体靶向肽SS31可部分通过抑制程序性坏死保护661W细胞，对抗氧化应激引起的损伤。
视网膜感光细胞;氧化损伤;程序性坏死;线粒体靶向肽SS31;抗氧化应激
西安医学院
硕士
眼科学
何媛
2020
中文
R774.1
2020-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）