TGR5对胃癌细胞恶性表型的影响
胃癌是全球发病率第五位、死亡率第三位的恶性肿瘤。胃癌的发生涉及多种危险因素，包括幽门螺杆菌感染、年龄、吸烟、饮食、胆汁反流等。胆汁酸是以胆固醇为原料在肝脏中合成的化合物，是胆汁反流的主要成分。胆汁酸在体内不仅参与脂质、葡萄糖、能量代谢的稳态调节，还通过胆汁酸受体介导发挥信号分子作用。TGR5是一种胆汁酸膜受体，属于G蛋白偶联受体家族。胆汁酸刺激后，TGR5通过偶联的G蛋白发挥信号转导作用。新近研究显示，TGR5在多种肿瘤中表达异常，可能参与恶性肿瘤的发生发展。本课题组前期研究证实，TGR5在胃粘膜肠化生组织中高表达，并通过上调肝细胞核因子4α促进CDX2、MUC2等多种肠型标志分子在胃上皮细胞中的表达。在此基础上，本实验将检测TGR5在胃癌组织中的表达水平，并探索TGR5对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为的影响，为深入理解胃癌发生发展机制提供更多实验依据。 第一部分 TGR5在胃癌组织中的表达及临床意义 目的： 探讨TGR5在胃癌组织中的表达及临床意义。 方法： 利用免疫组织化学染色方法，在含有105对胃癌及癌旁组织的芯片中检测TGR5表达情况。并探讨TGR5表达水平与胃癌患者临床病理参数及生存期的关系。 结果： 1.TGR5在胃上皮细胞的胞质和胞膜中表达。 2.TGR5在胃癌及癌旁组织中均有表达。105例胃癌组织中有43例高表达TGR5，而癌旁组织中仅有10例高表达TGR5，两组差异有统计学意义（P＜0.008）。20例伴肠化生癌旁组织中有10例高表达TGR5，而85例不伴肠化生的癌旁组织中未发现TGR5高表达，两组差异有统计学意义（P＜0.001）。 3.TGR5高表达率在不同肿瘤大小之间存在差异（P=0.018），而与性别、年龄、病理分级、TNM分期、远处转移等无关（P＞0.05）。TGR5表达与胃癌患者预后无关。 结论： TGR5在胃癌组织中的高表达率显著高于癌旁组织，并且TGR5高表达率随肿瘤体积增大而增强。 第二部分 TGR5对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响 目的： 探讨TGR5对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法： TGR5特异性小分子干扰RNA处理胃癌AGS、MKN-45细胞后构建TGR5敲减细胞系，慢病毒载体转染胃癌SGC-7901细胞构建TGR5过表达细胞系。借助CCK-8实验、克隆形成实验检测TGR5对细胞增殖能力的影响，流式细胞仪检测TGR5对细胞周期及凋亡的影响，Tanswell实验检测TGR5对胃癌细胞迁移及侵袭的影响。裸鼠成瘤实验检测胃癌细胞的体内生长能力。Western blot检测EMT相关分子β-连环蛋白（β-catenin）、锌脂蛋白转录因子（Snail）、ZEB1在AGS、MKN-45及SGC-7901胃癌细胞中的表达。 结果： 1.TGR5在正常人胃上皮永生化细胞株GES-1及各胃癌细胞系中均有表达。 2.TGR5促进胃癌细胞的体内外生长 TGR5敲减导致胃癌AGS和MKN-45细胞增殖能力减弱，而过表达TGR5则显著增强了胃癌SGC-7901细胞的增殖能力。在裸鼠中，LV-TGR5组移植瘤的大小、体积及Ki-67染色强度明显高于对照组。 3.TGR5抑制胃癌细胞凋亡但不影响细胞周期分布 在AGS及MKN-45细胞中，敲低TGR5后细胞凋亡率均明显升高。TGR5过表达后显著降低胃癌SGC-7901细胞的凋亡率。在AGS、MKN-45及SGC-7901细胞中敲低或过表达TGR5对G0/G1、G2及S期细胞分布无影响。 4.TGR5促进胃癌细胞迁移及侵袭 侵袭及迁移实验表明，TGR5敲低后从小室穿出的AGS及MKN-45细胞数量较对照组减少；相反，TGR5过表达后从小室穿出的SGC-7901细胞数量显著增多。上调TGR5表达后，SGC-7901细胞中β-catenin、Snail、ZEB1蛋白表达升高。敲低TGR5表达后，AGS细胞中β-catenin、Snail、ZEB1表达降低。 结论： TGR5介导胃癌细胞增殖及迁移能力的增强，并抑制细胞凋亡。TGR5可能通过调控EMT途径参与胃癌细胞转移。
胃癌;恶性表型;病理机制;TGR5蛋白;蛋白表达
西安医学院
硕士
内科学
时永全
2020
中文
R735.2;R730.21
2020-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）