靶向抑制GOLPH3与胶质瘤细胞阿霉素化疗敏感性变化的相关研究
背景： 脑胶质瘤是神经外科最常见的恶性肿瘤，治疗效果差，易复发，死亡率高，尤其WHO IV级的胶质母细胞瘤（GBM）患者更是如此。胶质瘤具有增殖快，浸润生长，放化疗耐受等特性。胶质瘤的治疗方法有传统开颅手术，定向放射治疗，化疗药物治疗，免疫治疗以及分子靶向治疗等。近些年来随分子生物学研究深入，肿瘤细胞发生发展的分子机制研究越来越透彻。人们发现肿瘤的生物学行为与一些癌蛋白过度表达，相关信号通路被激活有关。这些研究为人类在根本上治愈恶性肿瘤，提供了可能。分子靶向治疗就是针对肿瘤细胞中的某一关键分子，阻断、抑制其功能，从而抑制或杀死肿瘤细胞。因此，寻找治疗靶点是分子靶向治疗的一个重点。GOLPH3是一种新近发现的癌蛋白，在多种恶性肿瘤中过度表达，表达量与肿瘤的病理级别正相关。GOLPH3与肿瘤的增殖分裂、侵袭、迁移，化疗耐药等生物学行为密切相关。初步发现GOLPH3可能与胶质瘤细胞对阿霉素的敏感性以及阿霉素引起的DNA损伤修复有关；GOLPH3的这种功能可能与AKT1和UBE2S有关。GOLPH3可能是胶质瘤分子靶向治疗的潜在靶点。基于此基础，做了如下相关实验研究。 目的： 研究靶向抑制GOLPH3后胶质瘤细胞对阿霉素敏感性变化；研究靶向抑制GOLPH3联合使用阿霉素后胶质瘤细胞凋亡变化；研究分析在抑制GOLPH3表达及应用阿霉素处理后，AKT1、GOLPH3、UBE2S三者之间关系。 方法： 1、利用小干扰siRNA转染技术，瞬时转染处理胶质瘤细胞U251、U87细胞系，得到GOLPH3不同表达水平的胶质瘤细胞，通过Western blot及RT-PCR实验技术检测转染效果。 2、依据是否下调GOLPH3表达，将U251、U87细胞系分别分为对照组和处理组。将各分组细胞，分别联合阿霉素处理。应用CCK-8法检测各组细胞阿霉素IC50值改变；应用流式细胞术检测各组细胞凋亡变化；应用Western blot技术检测相关蛋白AKT1、UBE2S与GOLPH3变化的相关关系。 结果： 1、经Western blot验证，瞬时转染处理U251、U87细胞系后，能有效下调各组GOLPH3的表达水平，P＜0.05。 2、在靶向抑制GOLPH3表达后，对于U251、U87细胞对阿霉素的IC50值分别由原来的(26.53±3.6)μg/ml和(30.62±4.1)μg/ml，变为(7.45±1.4)μg/ml和(12.51±2.5)μg/ml。差异显著有统计学意义(P＜0.05)。 3、靶向抑制GOLPH3表达并联合阿霉素治疗后，U251、U87胶质瘤细胞各组中晚期凋亡及坏死变化，自对照组、GOLPH3-siRNA处理组、阿霉素处理组到联合处理组，依次增加，组间差异具有统计学意义（P＜0.05），联合处理组相较于其余三组尤为明显（P＜0.01）；U251、U87胶质瘤细胞各组中早期凋亡变化，U251细胞系中，组间差异具有统计学意义（P＜0.05），U87细胞系中，组间差异不具有统计学意义（P＞0.05）。 4、经Western blot实验验证，U251细胞系中下调GOLPH3表达水平以及联合阿霉素治疗后，相对于对照组，GOLPH3-siRNA处理组，AKT1、UBE2S表达水平降低（P＜0.05）；阿霉素处理组，AKT1、UBE2S表达水平降低（P＜0.05）；联合处理组，AKT1、UBE2S表达水平较对照组及单因素处理组均明显下调（P＜0.01），结果有统计学差异。 结论： 靶向抑制GOLPH3可以增加胶质瘤细胞对阿霉素敏感性；靶向抑制GOLPH3联合阿霉素能明显促进胶质瘤细胞凋亡；GOLPH3-AKT1-UBE2S通路在胶质瘤阿霉素耐药中起重要作用。
脑胶质瘤;GOLPH3蛋白;蛋白表达;阿霉素;敏感性
泰山医学院
硕士
外科学
王运华
2016
中文
R739.41
2020-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）