HMGB1对肿瘤相关巨噬细胞的调控在口腔鳞状细胞癌侵袭和转移中的作用及机制研究
研究目的： 口腔鳞状细胞癌（OSCC）是头颈部发病率最高、最常见的极具侵袭性的恶性肿瘤之一，患者五年生存率不足50%。OSCC局部浸润率高、转移能力强，且后期易复发，其侵袭和转移的特点是导致OSCC死亡率居高不下的主要原因。OSCC侵袭和转移的发病机制目前尚未完全阐明。在肿瘤微环境（TME）中，肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）可通过产生多种因子及金属蛋白酶等调节肿瘤的侵袭和转移，还可以通过影响TAMs的M2型极化状态进而调节肿瘤的侵袭和转移，TAMs在TME的调控中占据重要地位。高转移率族蛋白B1（HMGB1）属于高转移率族蛋白家族成员，主要来源于肿瘤细胞，在多种癌症的侵袭、转移及预后中发挥关键作用。临床研究表明HMGB1在OSCC组织中高表达，提示HMGB1可能在OSCC的发生发展中发挥重要作用。研究表明HMGB1可以对TAMs分泌的细胞因子进行调控，进而干预肿瘤进展。本课题主要探究OSCC肿瘤细胞来源的HMGB1对TAMs分泌细胞因子的调控在OSCC侵袭和转移中的作用，进一步阐明OSCC肿瘤微环境中肿瘤细胞与TAMs之间的交互调控作用及其可能发生的机制，为OSCC的干预治疗提供新的实验依据和潜在的治疗策略。 研究方法： 以口腔鳞状细胞癌Cal27细胞及Raw264.7巨噬细胞为实验对象，采用HMGB1的siRNA和外源性rhHMGB1蛋白进行干预。Real-time PCR以及Western blot实验检测OSCC肿瘤细胞来源的HMGB1基因及蛋白表达。细胞划痕实验以及Transwell实验检测OSCC肿瘤细胞侵袭和转移的能力。Real-time PCR以及ELISA实验检测TAMs分泌因子的基因和蛋白表达。 研究结果： 1、在基因水平与蛋白水平上，与正常表皮细胞Hacat相比，HMGB1在Cal27细胞中均表现为表达升高；HMGB1的siRNA转染Cal27细胞36h后，与阴性对照组相比，在基因水平上，HMGB1在Cal27细胞中的表达量下降约50%；HMGB1的siRNA转染Cal27细胞48h后，与阴性对照组相比，HMGB1在Cal27细胞中的蛋白表达量下降约40%。 2、HMGB1的siRNA转染Cal27细胞24h，收集Cal27细胞上清液作用于Raw264.7细胞12h，换为新鲜培养基作用Raw264.7细胞12h后，收集Raw264.7细胞上清液作用新孵育的Cal27细胞24h或48h，细胞划痕实验结果显示，与阴性对照组相比，Cal27细胞的转移面积降低，转移能力受到抑制；Transwell实验结果显示，与阴性对照组相比，Cal27细胞转移和侵袭的细胞数量下降。 3、收集Cal27细胞上清液与外源性rhHMGB1蛋白加入到Raw264.7细胞中作用12h后，换成新鲜培养基孵育12h，收集Raw264.7细胞上清液作用新孵育的Cal27细胞24h或48h，细胞划痕实验结果显示，与对照组相比，Cal27细胞的转移面积增加，转移能力增强；Transwell实验结果显示，与对照组相比，Cal27细胞转移和侵袭的细胞数量明显增加。 4、HMGB1的siRNA转染Cal27细胞24h，收集Cal27细胞上清液作用于Raw264.7细胞12h，换成新鲜培养基孵育12h，ELISA实验结果显示，与阴性对照组相比，TAMs分泌的细胞因子IL-6蛋白表达水平下降明显，IL-10蛋白表达水平下降；Real-time PCR实验结果显示，与阴性对照组相比，TAMs分泌细胞因子IL-6和IL-10基因表达水平下降。 5、收集Cal27细胞上清液与外源性rhHMGB1蛋白加入到Raw264.7细胞中作用12h，换成新鲜培养基孵育12h，ELISA实验结果显示，与对照组比较，TAMs分泌的细胞因子IL-6和IL-10蛋白表达水平均有上升；Real-time PCR实验结果显示，与对照组比较，TAMs分泌细胞因子IL-6和IL-10基因表达水平升高。 研究结论： 1、HMGB1在OSCC肿瘤细胞中高表达。 2、OSCC肿瘤细胞来源的HMGB1上调TAMs分泌细胞因子IL-6和IL-10的基因和蛋白表达。 3、OSCC肿瘤细胞来源的HMGB1通过上调TAMs分泌细胞因子IL-6和IL-10的表达进而促进OSCC肿瘤细胞的侵袭和转移。
口腔鳞状细胞癌;高转移率族蛋白B1;肿瘤相关巨噬细胞;肿瘤侵袭;肿瘤转移;调控机制
吉林大学
硕士
口腔基础医学
李波
2020
中文
R739.8;R730.2
2020-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）