五味子乙素对缺血再灌注致急性肾损伤的影响及其可能机制
目的：体内外共同观察五味子乙素(schisandrin B,SchB )对肾缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)致急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的影响，并探讨其可能的作用机制。 方法：1、体内实验：将雄性的45只C57BL/6小鼠随机性的分成3组，15只/组，即假手术组(Sham组)、模型组(即缺血再灌注组，I/R组)与五味子乙素预保护组(SchB+I/R组)，Sham组与I/R组小鼠在建模前用橄榄油(2 ml/kg)连续灌胃7天，SchB+I/R组小鼠在建模前用SchB[80mg/(kg·d)]连续灌胃7天，构建肾缺血再灌注模型所选用的方法为双侧肾蒂夹闭法，于再灌注后的第1、2、7天各组按随机数字表法选取5只小鼠，取小鼠眼眦内静脉血检测血肌酐(serum creatinine，Scr)与血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)；HE染色与糖原PAS染色观察小鼠肾组织所发生的损伤情况；RT-PCR检测肾组织中NGAL、Kim-1肾损伤相关mRNA的表达量；Westernblot检测肾组织中caspase-3、Bcl-2、Bax凋亡相关蛋白及LC3自噬相关蛋白的表达量；TUNEL染色法检测肾组织内小管上皮细胞所发生的凋亡情况。2、体外实验：随机性将体外培养的肾小管上皮细胞(HK-2)分为对照组、缺氧/复氧组(Hypoxia/Reoxygenation，H12/R6h、H12/R12h、H12/R24h )、SchB+H/R组(SchB+H12/R6h、SchB+H12/R12h、SchB+H12/R24h)，SchB+H/R组首先用SchB预孵育6h后再行缺氧/复氧处理，CCK8试剂盒检测各组HK-2细胞的活性，Westernblot所需检测的蛋白同体内实验，Annexin-V/PI染色检测HK-2细胞的凋亡率。 结果：1、体内实验：血Scr与血BUN结果显示，第1、2天，与Sham组比较，SchB+I/R组血Scr与BUN水平均显著升高，与I/R组比较，SchB+I/R组血Scr与BUN水平均显著降低；I/R组与SchB+I/R组血Scr与BUN水平均在第1天最高，第2、7天则逐渐下降，且在第7天已恢复正常水平。HE染色结果显示，Sham组小鼠肾组织的结构未见明显改变；I/R组小鼠肾组织间质可见大量炎性细胞的浸润，小管损伤明显加重等；而SchB+I/R组病变明显轻于I/R组，且I/R组与SchB+I/R组肾组织均在第1天损伤最重，第2、7天则逐渐减轻。糖原PAS结果显示，Sham组肾组织结构未发生改变；I/R组肾组织内肾小球系膜细胞出现增生，且有PAS阳性染色物质的沉积，小球上的血管壁发生非均匀性的增厚；SchB+I/R组肾组织所出现的病理改变则是明显较I/R组轻，且I/R组与SchB+I/R组肾组织均在第1天发生的病理改变最重，第2、7天则逐渐减轻。RT-PCR结果显示，第1、2天，与Sham组比较，I/R组与SchB+I/R组肾组织中Kim-1、NGALmRNA水平均显著升高，且I/R组上升更为显著；I/R组与SchB+I/R组肾组织中Kim-1、NGALmRNA水平均在第1天最高，第2、7天则逐渐下降。Westernblot结果显示，在第1、2天，与Sham组比较，I/R组与SchB+I/R组肾组织中caspase-3、LC3蛋白表达明显升高，Bcl-2/Bax值明显降低；而与I/R组相比，SchB+I/R组caspase-3蛋白表达减少，Bcl-2/Bax比值、LC3蛋白表达增多；在第7天三组肾组织中相关蛋白的表达已无差别。TUNEL染色结果显示，与Sham组相比，I/R组与SchB+I/R组中凋亡指数均明显的升高，而I/R组凋亡指数明显高于SchB+I/R组，且I/R组与SchB+I/R组均在第1天凋亡指数最高，第2、7天则逐渐降低，在第7天与Sham组已无差别。2、体外实验：CCK8结果显示，H/R组与SchB+H/R组的细胞活性均出现明显的下降，但SchB+H/R组较H/R组的细胞活性是增长的，且随复氧时间的延长，各组细胞活性逐渐增多；Westernblot结果显示，与对照组相比，H/R组与SchB+H/R组HK-2细胞中LC3蛋白表达明显升高、Bcl-2/Bax值明显降低，与H/R组相比，SchB+H/R组LC3水平与Bcl-2/Bax比值均上升，且随复氧时间的延长，两组LC3水平下降、Bcl-2/Bax值上升；Annexin-V/PI染色结果显示，与对照组相比，H/R组与SchB+H/R组细胞凋亡率均上升，但H/R组上升更为显著，且随复氧时间的延长，两组细胞凋亡率均减少。 结论：体内实验中，C57BL/6小鼠夹闭双侧肾蒂40min能够成功诱导出I/R所致的AKI模型，SchB对缺血再灌注致AKI小鼠的肾功能、病理损伤及细胞凋亡情况有一定的改善作用；SchB对缺氧/复氧造成HK-2细胞的死亡有一定保护作用，其可能与调节凋亡相关因子caspase-3、Bcl-2、Bax与自噬相关因子LC3有关，且在AKI的早期SchB所发挥的保护作用更为显著。
缺血再灌注;急性肾损伤;五味子乙素;动物实验
天津医科大学
硕士
中西医结合
张勉之
2019
中文
R285.5;R692
2020-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）