镉诱导线粒体ROS抑制XIAP通路导致神经细胞凋亡机理研究
本研究采用细胞培养、TUNEL/DAPI染色、细胞ROS标记、MTS细胞活力和免疫细胞化学分析、RNA干扰、Westernblot分析等细胞分子生物学技术和方法；以PC12细胞和小鼠原代神经细胞为实验对象，探究了镉通过诱导线粒体ROS抑制XIAP通路致神经细胞凋亡分子机理。结果如下： 1镉诱导ROS抑制XIAP通路导致神经细胞凋亡 PC12细胞和小鼠原代神经元用NAC（5mM）或Embelin（20μM）预处理1h后暴露镉（10和20μM）4h或24h。Westernblot分析细胞蛋白表达，免疫荧光染色分析XIAP蛋白表达，ROS荧光标记细胞ROS水平，DAPI/TUNEL双染色评估细胞凋亡表现。结果显示：镉以浓度依赖方式诱导ROS并导致神经细胞凋亡，XIAP通路被抑制并且Cleaved-caspase-3和Cleaved-PARP被激活增加；预处理NAC显著降低镉神经毒性，而预处理Embelin则加剧镉的毒性作用。提示：镉诱导ROS抑制XIAP通路导致神经细胞凋亡。 2XIAP在镉诱导ROS依赖的神经细胞凋亡中发挥关键作用 感染慢病毒shRNAXIAP、shRNAGFP、EGFP和FLAG-XIAP的PC12细胞用Nutlin-3a（10μM）预处理1h后暴露镉（10μM）4h或24h。Westernblot分析细胞蛋白表达，MTS分析细胞活力，ROS荧光标记细胞ROS水平，DAPI染色评估细胞凋亡表现。结果显示：Nutlin-3a通过阻滞MDM2与p53的结合抵抗镉诱导细胞凋亡；下调XIAP显著减少镉诱导细胞ROS与凋亡表现；过表达XIAP也显著抵抗镉诱导细胞ROS与凋亡。提示：XIAP在镉诱导ROS依赖的神经细胞凋亡中发挥关键作用。 3镉诱导线粒体ROS抑制XIAP通路致神经细胞凋亡 PC12细胞和小鼠原代神经元、或感染shRNAXIAP、shRNAGFP的PC12细胞用Embelin（20μM）和/或Mito-TEMPO（10μM）预处理1h后暴露镉4h或24h。Westernblot分析细胞蛋白表达，MTS分析细胞活力，ROS荧光标记细胞ROS水平，DAPI染色评估细胞凋亡表现。结果显示：Mito-TEMPO显著改善镉和/或Embelin诱导的神经细胞XIAP通路失活和凋亡；下调XIAP增强Mito-TEMPO的神经保护作用。提示：镉诱导线粒体ROS抑制XIAP通路致神经细胞凋亡。
镉离子;神经细胞;线粒体;XIAP通路;凋亡机理
南京师范大学
硕士
生物学
陈龙
2019
中文
R392
2020-04-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）