二甲双胍通过mTOR-PTEN/Akt通路抑制hsBAFF依赖的B细胞增殖和存活机理研究
本研究采用蛋白印迹分析、RNA干扰、细胞计数、MTS分析、台盼蓝染色等实验方法，以Raji细胞和小鼠原代脾脏B（PrimaryB）细胞为实验对象，研究了二甲双胍通过mTOR/S6K1经PTEN/Akt-Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力分子机理。结果如下： 1二甲双胍经Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力 Raji细胞和PrimaryB细胞、感染shRNAErk1/2、shRNAGFP的Raji细胞、或感染Ad-MKK1-R4F、Ad-MKK1-K97M和Ad-GFP的Raji细胞，用不同浓度二甲双胍（1-5mM）预处理4h后经hsBAFF（2.5μg/ml）刺激12或48h、或用二甲双胍（1.5mM）预处理4h后用hsBAFF（2.5μg/ml）刺激12或48h、或用Erk1/2抑制剂U0126（5μM）处理1h后再用hsBAFF（2.5μg/ml）刺激12或48h后。Westernblot分析相关蛋白表达，分别用细胞计数、MTS分析和台盼蓝染色评估细胞增殖和活力。结果显示，二甲双胍浓度依赖地抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力；二甲双胍抑制hsBAFF诱导B细胞Erk1/2磷酸化；抑制Erk1/2强化二甲双胍抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力；二甲双胍通过MKK1-Erk1/2途径抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力。提示：二甲双胍经Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力。 2二甲双胍经PTEN/Akt-Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力 Raji细胞和PrimaryB细胞、或分别感染Ad-PTEN、Ad-dn-Akt和Ad-GFP的Raji细胞，用不同浓度的二甲双胍（1-5mM）预处理4h后用hsBAFF（2.5μg/ml）刺激12h，或用二甲双胍（1.5mM）预处理4h，再用AktinhibitorX（20μM）或U0126（5μM）处理1h后，用hsBAFF（2.5μg/ml）刺激12或48h。Westernblot分析相关蛋白表达，细胞计数、MTS分析分别评估细胞增殖和活力。结果显示，二甲双胍抑制hsBAFF诱导B细胞PTEN和Akt磷酸化；钝化Akt表达增强二甲双胍抑制hsBAFF诱导Erk1/2依赖的B细胞增殖和活力；过表达PTEN强化二甲双胍抑制hsBAFF诱导Akt-Erk1/2依赖的B细胞增殖和活力。提示：二甲双胍经PTEN/Akt-Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力。 3二甲双胍通过mTOR/S6K1信号转导抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力 Raji细胞和PrimaryB细胞、或感染shRNAmTOR和shRNAGFP的Raji细胞，用二甲双胍（1-5mM或1.5mM）预处理4h后再用hsBAFF（2.5μg/ml）刺激12或48h、或用二甲双胍（1.5mM）预处理4h并用雷帕霉素预（100ng/ml）处理2h后，加hsBAFF（2.5μg/ml）刺激12或48h。Westernblot分析相关蛋白表达，细胞计数、MTS分析分别评估细胞增殖和活力。结果显示，二甲双胍抑制hsBAFF诱导B细胞S6K1磷酸化；雷帕霉素强化二甲双胍抑制S6K1和PTEN/Akt-Erk1/2通路削弱hsBAFF刺激B细胞增殖和活力；下调mTOR增强二甲双胍经PTEN/Akt-Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力。提示：二甲双胍通过mTOR/S6K1经PTEN/Akt-Erk1/2通路抑制hsBAFF刺激B细胞增殖和活力。
二甲双胍;人源B细胞刺激因子;哺乳动物雷帕霉素靶蛋白;核糖体S6蛋白激酶1;B细胞增殖
南京师范大学
硕士
生物学
陈龙
2019
中文
R392
2020-04-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）