RVD2对不同中医证型脓毒症急性肺损伤的保护作用及其受体检测的临床价值研究
目的： 研究消退素D2对CLP脓毒症模型小鼠肺损伤的保护作用及其分子机制,以及其受体GPR18在脓毒症病人外周血PMNs上表达量与预后的关系。 方法： 第一部分：消退素D2对CLP脓毒症模型小鼠肺损伤的保护作用及分子机制研究:将雄性C57BL/6小鼠随机分为三组：假手术（SO）组；CLP脓毒症组；CLP+RVD2组。分别予以等体积的PBS及RVD2处理，观察小鼠7天。同样处理的小鼠进行平行实验，造模后24小时处死小鼠，收集小鼠肺组织，观察其肺组织病理变化，测定其MPO活性，使用WesternBlot对其分子机制进行探索，收集三组小鼠肺泡灌洗液，测定炎性因子（TNF-α,IL-1β,IL-6）以及白蛋白的区别。 第二部分：消退素D2受体（GPR18）在脓毒症患者PMNs中的表达作为判断预后生物标记物的研究 1、消退素D2受体-GPR18在PMNs上表达量对脓毒症患者预后的预测作用：选取自2015年4月至2017年4月天津市南开医院ICU脓毒症病人81例，使用流式细胞术检测外周全血中PMNs上GPR18表达量与健康对照30例进行比较。记录患者APACHEII、SOFA评分以及患者相关信息并与GPR18表达量进行统计学分析。使用不同浓度LPS（或相同浓度不同时间）以及TLR4拮抗剂处理健康志愿者PMNs，流式细胞术检测其对GPR18阳性率的影响。 2、分别分析中医分型“三证三法”与GPR18阳性率以及28天生存率之间的关系。 结果： 1、RVD2明显提高CLP模型小鼠的生存率。我们使用生存曲线评估SO组、CLP组、CLP+RVD2组的7天生存率。SO组所有小鼠均存活至7天，CLP组小鼠生存率明显下降，CLP+RVD2组相较于CLP组生存率明显提高。 2、RVD2减轻CLP引起的肺组织病理学改变。我们于建模后24h将三组小鼠处死，取出肺组织行HE切片染色，于显微镜下观察，并进行病理学评分。结果显示，RvD2显著减轻CLP诱导的组织病理学改变，致使肺损伤评分下降。 3、RVD2降低了脓毒症造成的肺损伤中MPO的活性。建模24小时后，CLP组小鼠肺组织中MPO活性相对SO组明显增高，而经RVD2治疗的CLP组小鼠，其肺组织中的MPO活性则显著下降。 4、RVD2降低了CLP小鼠肺组织通透性。建模后24h，小鼠肺泡灌洗液中白蛋白水平显著升高，RvD2可降低其水平。由此得知，RvD2降低了CLP诱导的脓毒症模型组小鼠肺组织的通透性。 5、RVD2降低了CLP组小鼠肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β以及IL-6炎性因子的含量。CLP组的促炎因子相较于SO组明显升高，而RVD2组相较于CLP组明显降低。 6、RVD2受体(GPR18)于外周血中PMNs上表达量对判断脓毒症患者预后具有一定的临床价值:GPR18阳性率与脓毒症患者病情严重程度呈负相关，并可以帮助判断患者28天存活率。 7、病人使用中医“三证三法”分型，各型的GPR18表达量并无明显差异。毒热证组脓毒症病人的28天生存率明显高于非毒热证组。 8、LPS-TOLL样受体4（TLR4）抑制了PMNs上GPR18的表达：GPR18表达率的下降与LPS浓度的增加存在剂量依赖关系，与时间亦存在依赖关系。且通过TLR4拮抗剂TAK-242可阻滞这一变化。 结论： RVD2可明显改善由CLP引起的急性肺损伤，减少中性粒细胞浸润，抑制促炎细胞因子分泌，减轻组织病理损伤，提高小鼠生存率。RVD2受体-GPR18在脓毒症病人外周血PMN上的表达情况与病情严重性呈负相关。且GPR18的表达受LPS-TLR4信号通路调控。
消退素D2;脓毒症;急性肺损伤;中性粒细胞
天津医科大学
博士
中西医结合
王西墨
2019
中文
R631.2;R563
2020-04-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）