长链非编码RNA LINC01137在食管鳞状细胞癌中的表达和作用
目的：食管鳞状细胞癌（Esophagealsquamouscellcarcinoma，ESCC）是常见的侵袭性恶性肿瘤，死亡率很高。探索其发生发展的分子机制和寻找新的诊断治疗靶点对ESCC的治疗具有重要意义。研究发现长链非编码RNA（Longnon-codingRNA，lncRNA）参与许多疾病的发展，且与肿瘤之间的关系也被越来越多的人所关注，已有大量报道表明lncRNA与多种肿瘤的发生发展、转移侵袭和生存时间紧密相关。近年来研究发现ESCC的发生也受到多种lncRNA的调控。 本课题研究了lncRNALINC01137在ESCC中的表达及在ESCC细胞生长、迁移和侵袭中的作用。结果发现LINC01137在ESCC中表达显著上调，且在ESCC细胞系中表达明显高于正常食管鳞状上皮细胞系，其表达升高提示LINC01137可能在ESCC的发生发展中发挥作用。我们应用小干扰RNA（SmallinterferingRNA，siRNA）敲低ESCC细胞中LINC01137的表达，并分析下调LINC01137对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。通过研究LINC01137在ESCC中的表达及其在调控ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭中的作用，为揭示ESCC的发生、进展机制及寻找新的治疗靶点提供理论依据。 方法： 1.应用RT-qPCR方法检测LINC01137在10例ESCC组织及邻近癌旁组织中的表达，同时检测LINC01137在1种正常食管鳞状上皮细胞系（Het-1a）和4种ESCC细胞系（Eca109，Kyse130，Kyse150，Kysete1）中的表达。 2.设计靶向LINC01137的两个siRNA，转染ESCC细胞，敲低LINC01137的表达。 3.应用CCK-8实验、集落形成实验分析下调LINC01137的表达对ESCC细胞增殖能力的影响。 4.应用Transwell实验研究敲低LINC01137的表达对ESCC细胞迁移和侵袭能力的影响。 5.应用WesternBlot实验检测敲低LINC01137的表达后对增殖和EMT相关蛋白的影响。 6.应用细胞胞浆胞核分离实验检测LINC01137在ESCC细胞中的定位。 结果： 1.LINC01137在ESCC组织中的表达 采用RT-qPCR实验方法，检测LINC01137在10例ESCC组织和癌旁正常食管组织中的表达，结果发现LINC01137在其中9例ESCC组织中的表达明显高于癌旁正常组织，具有统计学意义（P<0.01）。 2.LINC01137在ESCC细胞系中的表达 采用RT-qPCR实验方法，检测LINC01137在1种正常食管鳞状上皮细胞系（Het-1a）和4种ESCC细胞系（Eca109，Kyse130，Kys150，Kysete1）中的表达，结果显示LINC01137在ESCC细胞系的表达明显高于正常食管鳞状上皮细胞系，具有统计学意义（P<0.01）。同时我们发现LINC01137在ESCC细胞Eca109和Kyse130中表达相对较高，因此，后期实验我们选用Eca109和Kyse130细胞系进行。 3.构建siRNA敲低LINC01137的表达 我们设计两对靶向LINC01137的siRNA（siLINC01137-1和siLINC01137-2）来下调ESCC细胞Eca109和Kyse130中LINC01137的表达，转染48小时后收集细胞，提取总RNA，采用RT-qPCR方法检测敲低效率，结果显示与对照组相比，转染siLINC01137-1和siLINC01137-2组都能使LINC01137表达下降超过50%（P<0.01），表明这两个靶向LINC01137的siRNA均可显著敲低LINC01137的表达。 4.敲低LINC01137对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响 在ESCC细胞Eca109和Kyse130中，转染siLINC01137-1和siLINC01137-2，敲低LINC01137表达后进行CCK-8增殖实验，集落形成实验，Transwell迁移侵袭实验，结果显示，与对照组相比，下调LINC01137的表达明显抑制ESCC细胞Eca109和Kyse130的增殖、迁移和侵袭能力，并具有显著统计学差异（P<0.05）。 5.采用WesternBlot实验方法检测敲低LINC01137表达后增殖及EMT相关蛋白的变化。 在ESCC细胞Eca109和Kyse130中转染siLINC01137-1和siLINC01137-2，培养48小时后分别提取总蛋白，应用WesternBlot实验检测下调LINC01137表达后增殖及EMT相关蛋白的表达变化，结果显示，与对照组相比，实验组增殖相关蛋白CyclinD1和Survivin表达明显下降，且EMT相关蛋白Snail、Vimentin及Mmp9表达也明显下降。 6.LINC01137在ESCC细胞中的定位 采用胞浆胞核分离方法，使ESCC细胞Eca109和Kyse130的胞浆和胞核成分相互分离，再分别提取总RNA，应用RT-qPCR方法分别检测LINC01137在胞浆和胞核中的表达。结果发现，在这两种细胞中LINC01137在胞浆中的表达均显著高于胞核中的表达，表明LINC01137主要定位在细胞胞浆。 结论： LINC01137在ESCC组织中表达明显高于癌旁正常食管组织，在ESCC细胞系中的表达同样明显高于正常食管鳞状上皮细胞系。敲低LINC01137的表达显著抑制ESCC细胞的增殖、迁移、侵袭能力，并且能够明显降低细胞增殖、EMT相关蛋白的表达。
食管鳞状细胞癌;长链非编码RNA;细胞增殖;侵袭能力;治疗靶点
河北医科大学
硕士
病理学与病理生理学
张祥宏
2019
中文
R735.1
2020-01-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）