电针对超促排卵大鼠围着床期子宫内膜血管生成的调节作用及其机制研究
第一部分 电针对超促排卵大鼠围着床期子宫内膜促血管生成相关因子的调节作用 目的:探究电针对超促排卵大鼠胚胎着床及围着床期子宫内膜血管生成的影响. 方法:将120只雌性大鼠平衡随机分为4组:正常组(N),模型组(M),电针组(EA)和预电针组(PEA),每组均为30只大鼠.M,EA和P EA组的大鼠通过腹腔注射孕马血清(PMSG),间隔46小时注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)的方法建立控制性超促排卵模型.注射HCG当晚合笼.N组大鼠在相同时间点注射等剂量的PBS并合笼.第二天阴道涂片若出现精子则视为交配成功并被定义为妊娠第一天( D1 ).EA组大鼠从PMSG注射当天开始电针刺,而PEA组大鼠从注射PMSG前3天开始电针刺,两组大鼠均针刺至D3.每组大鼠又分D4、D6、D8处死.子宫内膜微血管密度(MVD)用免疫组化法检测,免疫荧光、Real-time PCR和Western blotting用来检测子宫内膜血管形成相关因子内皮细胞生长因子A(VEGF-A)、血管生成素1(Ang-1)、成纤维细胞生长因子2(FGF-2)以及子宫NK细胞(uNK cell)相关的胎盘生长因子(PlGF)、delta样配体-1(DLL-1)的mRNA和蛋白表达.流式细胞术用于检测子宫内膜uNK细胞在子宫内膜淋巴细胞中的比例. 结果:1)M组大鼠胚胎着床数明显低于N组和PEA组,但 EA组大鼠的胚胎着床数与M组却没有统计学差异.2)与M组大鼠相比,N组和PEA组大鼠子宫内膜MVD在D4和D6明显增加,而EA组大鼠子宫内膜MVD在D6虽然有增加,但无显著统计学差异.3)N 组和 PEA组大鼠的 VEGF-A和 Ang-1 的相对蛋白表达量在 D4 和D6显著高于M组大鼠,但FGF-2的相对蛋白表达量除了PEA组和M组大鼠在D6有显著差异外,其他组间均无显著统计学差异.M 组和 EA 组大鼠的子宫内膜VEGF-A、Ang-1和FGF-2的相对蛋白表达量在D4和 D6均未见统计学差异.4)N组和PEA组大鼠VEGF-A的mRNA相对表达量在围着床期显著高于M组.而FGF-2的mRNA表达除了PEA组和M组在D6有差异外,其他组间均无差异.与M组大鼠相比,N组和EA组大鼠Ang-1的mRNA表达量分别在D4和D6显著升高,PEA组mRNA表达量则在围着床期均显著升高.5)在D6和D8,N组和PEA组大鼠子宫内膜的DBA+ uNK细胞在淋巴细胞中的比例高于M组,而EA组大鼠的比例仅在D8显著高于M组.6)在D4,PlGF和DLL-1的蛋白相对表达量在4组间均无差异;在D6和D8,N组和PEA组大鼠的蛋白表达量显著高于M组.7)在D4和D6,P lGF和DLL-1的mRNA相对表达量在4组间均无差异;而在D8,N组和PEA组大鼠的mRN A表达量显著高于M组. 结论:促排前开始进行电针治疗可以促进超促排卵大鼠胚胎着床和子宫内膜血管生成. 第二部分 电针对超促排卵大鼠围着床期子宫内膜VEGFR2/PI3K/AKT和VEGFR2/ERK信号通路的调节作用 目的:探究电针对超促排卵大鼠围着床期子宫内膜血管生成相关的信号通路的调节. 方法:将40只雌性大鼠随机分为4组:正常组(N),模型组(M),电针组(EA)和预电针组(PEA),每组均为10只大鼠.M,EA和PEA组的大鼠通过腹腔注射孕马血清(PMSG),间隔46小时注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)的方法建立控制性超促排卵模型.注射HCG当晚合笼.N组大鼠在相同时间点注射等剂量的PBS并合笼.第二天阴道涂片若出现精子则视为交配成功并被定义为妊娠第一天( D1 ).EA组大鼠从PMSG注射当天开始电针刺,而PEA组大鼠从注射PMSG前3天开始电针刺,两组大鼠均针刺至D3.另取30只雌性大鼠,除接受与PEA组相同处理外,两侧子宫分别从子宫角宫腔注射si-VEGFR2和si-NC.每组大鼠分D4、D6、D8处死.子宫内膜微血管密度(MVD)用免疫组化法检测,Western blotting用来检测血管形成相关信号通路蛋白VEGFR2、PI3K、p-AKT和p-ERK的表达. 结果:M组大鼠子宫内膜的VEGFR2、PI3K、p-AKT、p-ERK的蛋白表达量均明显少于N组和PEA组大鼠.宫腔注射si-VEGFR2一侧的子宫的内膜PI3K、p-AKT、p-ERK的蛋白表达量均明显少于宫腔注射si-NC一侧的子宫.宫腔注射si-VEGFR2一侧的子宫的胚胎数和MVD也明显低于宫腔注射si-NC一侧的子宫. 结论:预电针治疗促进超促排卵大鼠胚胎着床和子宫内膜血管生成是通过 VEGFR2介导的PI3K/AKT和ERK通路实现的.
电针治疗;围着床期;子宫内膜;血管生成;超促排卵
华中科技大学
博士
中西医结合
黄光英
2019
中文
R321.3;R245.97
2019-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）