i-PRF对骨髓间充质干细胞增殖及分化的影响
目的： 本课题旨在研究可注射型富血小板纤维蛋白(Injective platelet-rich fibrin,i-PRF)对于兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、成骨矿化及分化的影响及分子机制,为i-PRF在临床口腔种植修复等方面提供应用依据. 方法： 1 本实验使用组织块法培养兔原代骨髓间充质干细胞,通过细胞形态观察及免疫荧光方法进行细胞鉴定.2 实验分为空白对照组、PRF组及i-PRF组.通过采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测三组细胞增殖能力.3 通过碱性磷酸酶(ALPase)检测试剂盒检测检测三组细胞内 ALPase 蛋白活性.4通过茜素红染色检测三组细胞成骨矿化结节形成情况;油红 O 染色检测三组细胞内脂滴形成情况.5 采用 RT-qPCR 检测三组细胞成骨分化相关基因 Runx2、BGP、OPN和成脂分化相关基因PPARγ的mRNA水平. 结果： 1 通过组织块法成功分离并培养兔牙槽骨组织来源细胞,显微镜下观察细胞为长梭形.细胞免疫荧光法检测结果显示培养所得细胞造血干细胞表面抗原 CD34呈阴性,而间充质干细胞系表面抗原 CD44、STRO-1 呈阳性,符合间充质干细胞表面抗原特征.2 兔 BMSCs 增殖能力检测结果:第 3、4、5、6 天 i-PRF 组和PRF 组细胞的增殖活性均显著强于空白组(均 P<0.05);第 3、4、5 天 i-PRF 组和PRF组两组细胞的增殖活性无显著性差异(均P>0.05),第6天i-PRF组细胞的增殖活性显著高于PRF组(P<0.05).这说明i-PRF与PRF均具有促进BMSCs增殖的能力,并且i-PRF促进BMSCs增殖的能力强于PRF.3 兔BMSCs内ALPase活性情况:第3、5、7、9天i-PRF组和PRF组细胞的ALPase活性均显著高于空白对照组(均P<0.01),而各个时间点i-PRF组与PRF组相比细胞内ALPase活性无显著性差异(均P>0.05).这说明 i-PRF有促进 BMSCs 成骨分化的效果等同于 PRF.4 兔BMSCs 钙化结节情况:i-PRF 组和 PRF 组细胞内钙结节形成量均显著高于空白组(均P<0.05);而i-PRF组与PRF组两组细胞的钙结节形成无显著性差异(P>0.05).这说明i-PRF具有与PRF相似的促进BMSCs成骨矿化的能力.5 成骨相关基因的表达:第5、7天i-PRF组和PRF组细胞的成骨相关基因Runx2、OPN和BGP的mRNA 水平均显著高于空白组(均 P<0.05);而各个时间点 i-PRF 组与 PRF 组相比Runx2、OPN、BGP 的 mRNA 水平无显著性差异(均 P>0.05).这说明 i-PRF 促进BMSCs内成骨相关基因表达的作用与PRF相似.6 兔BMSCs内脂滴形成情况:i-PRF 组和 PRF 组细胞内脂滴形成量均显著低于空白组(均 P<0.05);而 i-PRF 组与PRF组两组细胞的脂滴形成无显著性差异(P>0.05).这说明i-PRF与PRF均具有抑制 BMSCs 成脂分化的能力.7 成脂相关基因的表达:第 5、7 天 i-PRF 组和 PRF组细胞的成脂相关基因PPARγ的mRNA水平均显著低于空白组(均P<0.05);而各个时间点i-PRF组与PRF组相比PPARγ的mRNA水平无显著性差异(均P>0.05).这说明i-PRF抑制BMSCs内成脂相关基因表达的作用与PRF相似. 结论： 1体外培养的兔牙槽骨来源的细胞符合BMSCs的特征.2 i-PRF与PRF均可促进BMSCs细胞的增殖,i-PRF促进BMSCs增殖的效果优于PRF.3 i-PRF促进 BMSCs 成骨分化的能力等同于 PRF,i-PRF 促进成骨相关基因 Runx2、BGP、OPN的mRNA表达的能力等同于PRF.4 i-PRF抑制BMSCs细胞成脂分化的能力等同于PRF,抑制成脂相关基因PPARγ的mRNA表达的能力等同于PRF.
i-PRF蛋白;骨髓间充质干细胞;细胞增殖;成骨分化;成脂分化
华北理工大学
硕士
口腔临床医学
胡万宁;李健
2019
中文
R329.2
2019-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）