山东省鸭坦布苏病流行病学调查和DEFs对强弱毒株的天然免疫反应比较
鸭坦布苏病是由坦布苏病毒（Duck Tembusu Vieus,DTMUV）引起的一种主要感染鸭的传染病，产蛋鸭感染后产蛋率会急剧下降，雏鸭感染表现为神经症状和较高的死亡率。山东省内大部分养鸭地区均存在鸭坦布苏病，严重威胁着养鸭业的健康发展。鉴于目前鸭坦布苏病尚没有可靠的预防措施，进行流行病学调查，掌握鸭坦布苏病的流行动态及病原的变异情况，有助于鸭坦布苏病的及时防控。根据对鸭的致病性，DTMUV分为强毒株（如FX2010）和弱毒株(如MM1775)，目前关于两种毒株的宿主范围、致病性等方面的比较研究多见，宿主或者细胞对两种毒株的天然免疫应答研究较少，而天然免疫可能与毒株的致病性和传播有关。对强弱毒株引起的宿主的天然免疫反应进行比较，可以为揭示DTMUV的致病机理和筛选防治药物提供理论依据。 本研究对山东省不同品种、不同日龄的鸭群进行坦布病的流行调查。首先，在山东省内的泰安、菏泽、聊城等9个地区采集了未经免疫的鸭群血清4437份和临床疑似病例276份，以酶联免疫吸附试验检测血清中鸭坦布苏的抗体阳性率，以RT-PCR方法检测肝、脾、脑、肺、肾和心脏等器官中的DTMUV核酸，进一步对阳性病料进行病毒分离并测序毒力基因（E基因）序列，以Genbank上发表的流行DTMUV E基因序列为参考，构建E基因进化树并进行序列同源性比对分析。将我国流行的强毒株FX2010和蚊源的弱毒株MM1775以相同的剂量感染鸭胚成纤维细胞，在攻毒后不同时间点收集细胞样品，以相对荧光定量PCR方法检测攻毒后24和48h样品的模式识别受体（TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、RIG-Ⅰ和MDA5）炎性细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α）干扰素（IFN-α、IFN-β和IFN-γ）和干扰素刺激性应答基因（MX、OAS、PKR）等mRNA的表达量。 鸭坦布苏流行病学调查结果显示：在山东省不同地区的鸭群中，均检测到不同程度的DTMUV血清抗体阳性率，其中最高的是蛋鸭群（23.9%），其次是肉鸭群（13.9%），最低的是后备种鸭群（12.4%）；从地区来看：DTMUV阳性率最高的是泰安地区（21.0%），德州地区DTMUV阳性率最低（11.7%）；从鸭的品种来看，康贝尔鸭的血清阳性率（25.3%）高于金定鸭（23.6%），绍兴鸭（22.9%）高于樱桃谷鸭（13.60%）和枫叶鸭（12.91%）；进化树结果表明：分离毒株与FX2010处于一个大分支，弱毒MM1775位于另一个分支。核苷酸同源性分析结果显示：分离株与山东2017年的流行株氨基酸同源性为98-99.2%，与2010、2011和2012年的分离株氨基酸的同源性为96.8-98.6%。分离毒株与强毒株FX2010相比未发生关键氨基酸位点的突变。DTMUV对DEFs的感染结果显示：在感染早期FX2010和MM1775都能引起DE Fs的TLR3、RIG-Ⅰ和MDA5基因mRNA表达量上调，但上调的幅度不同，MM1775引起的表达量显著或及其显著高于FX2010；在感染后期FX2010和MM1775都能引起DEFs的炎性细胞因子IL-6和TNF-α基因mRNA表达量上调，但FX2010引起的表达量显著或及其显著高于MM1775；感染早期FX2010和MM1775都能引起DEFs的干扰素刺激性基因mRNA表达量上调，但MM1775引起的MX表达量及其显著高于FX2010。 2018年，山东省非免疫鸭群中仍存在鸭坦布苏病流行，不同鸭群的流行情况各不相同，不同地区的感染率高低不一，不同品种的鸭感染率差别较大；分离到的流行毒株都是强毒株，分离的流行毒株毒力基因未发生大的变异，分离株之间没有地区差异。FX2010和MM1775都能引起DEFs的PRRs及其下游基因表达上调，差异显著的有TLR3、RIG-Ⅰ、MDA5，IL-6、TNF-α、IFN-β和MX等。
鸭坦布苏病毒;流行病学;遗传进化;天然免疫
山东农业大学
硕士
基础兽医学
蔡玉梅
2019
中文
S858.32;S852.65
79
2019-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）