常山胡柚的“祖宗树”组织培养及其起源的研究
常山胡柚（Citrus changshan-huyou Y. B. Chang）起源于浙江省常山县，为柑桔属的一个新种，具有较高的营养价值和药用价值。常山胡柚是天然杂交种，有性繁殖会出现明显的性状分离现象，亲本的优良性状难以保持。另外，常山胡柚的起源至今尚不明确。因此，本论文开展了常山胡柚的“祖宗树”组织培养再生植株的研究;并利用国际上鉴定物种的通用引物，对常山胡柚的起源进行了分析。主要研究结果如下： （1）首先利用常山胡柚普通栽培品种的幼叶、幼茎和幼胚作为外植体进行培养，结果表明，幼胚是组织培养再生植株的最佳外植体。据此，选取常山胡柚的“祖宗树”幼胚为外植体，置于冰箱4℃处理6 d，在0.5 mg/L 6-BA+ 0.5 mg/L NAA的MS固体培养基上诱导愈伤组织频率最高(78％);愈伤组织在1 mg/L 6-BA的MS固体培养基中诱导丛生芽的分化率最高（78％）;丛生芽在0.4 mg/L IAA的MS固体培养基中，诱导生根效果最好。成功地建立了常山胡柚的“祖宗树”植株再生快繁体系，并得到了大量常山胡柚的“祖宗树”组培苗。 （2）选取常山胡柚的“祖宗树”、常山胡柚普通栽培品种、甜橙、衢橘、柚和椪柑作为材料，分别提取其基因组DNA。利用叶绿体特征基因片段（rbcL、rpoC1、rpoB和trnH-psbA）、5.8S rRNA和28S rRNA基因间隔区片段(ITS)、核糖体特征基因片段(18S rRNA-5S rRNA)和线粒体特征基因片段(nad1 exonB-C）序列设计引物，进行目的基因片段的扩增，分别获得了叶绿体特征基因序列24条（rbcL、rpoC1、rpoB和trnH-psbA各6条），基因间隔区序列6条，核糖体特征基因序列 6 条，线粒体特征基因序列 6条。利用 Clustal W 和MAGE 7.0制作系统进化树，ITS系统进化树结果显示常山胡柚“祖宗树”与甜橙和椪柑遗传距离最近;常山胡柚普通栽培品种与衢橘遗传距离最近。rbcL系统进化树结果显示常山胡柚“祖宗树”与柚的遗传距离最近;常山胡柚普通栽培品种与甜橙的遗传距离最近。rpoC1系统进化树结果显示常山胡柚“祖宗树”与常山胡柚普通栽培品种遗传距离最近。rpoB系统进化树结果显示常山胡柚“祖宗树”与柚的遗传距离最近;常山胡柚普通栽培品种与常山胡柚“祖宗树”遗传距离最近。trnH-psbA系统进化树结果显示常山胡柚“祖宗树”与甜橙的遗传距离最近;常山胡柚普通栽培品种与常山胡柚“祖宗树”遗传距离最近。18S-5S rRNA系统进化树结果显示，常山胡柚“祖宗树”与柚的遗传距离最近;常山胡柚普通栽培品种与柚的遗传距离最近。nad1 exonB-C系统进化树结果显示常山胡柚“祖宗树”与普通栽培常山胡柚、甜橙和椪柑的遗传距离最近，常山胡柚普通栽培品种与甜橙和椪柑的遗传距离最近。综合上述结果，显示常山胡柚“祖宗树”与甜橙、柚、衢橘和椪柑遗传距离均较近，常山胡柚“祖宗树”可能起源多种杂交;常山胡柚普通栽培品种来源于常山胡柚“祖宗树”，但与祖宗树并非完全一致，可能是在选育常山胡柚普通栽培品种时，常山胡柚不断地与甜橙、柚、衢橘和椪柑进行了杂交。 本研究成功建立了常山胡柚的“祖宗树”植株再生技术体系，为保存和利用“祖宗树”这一特有的种质资源提供了基础;另外，本研究结果显示常山胡柚为甜橙、柚、衢橘和椪柑等多重自然杂交形成的物种，研究结果对常山胡柚的育种和优良性状的开发具有重要的意义。
常山胡柚;祖宗树;组织培养;DNA条形码
杭州师范大学
硕士
植物学
向太和
2018
中文
S666.3
2019-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）