基于Toll样受体和Th1/Th2免疫平衡对摄涕止鼽方干预变应性鼻炎的机制研究
目的： 1. 探讨摄涕止鼽方对肺肾气虚型AR患者鼻腔黏膜TLR2和TLR4表达水平及血清IL-4和IFN-γ水平的影响。 2. 建立变应性鼻炎大鼠模型，使用LPS进行干预，探讨摄涕止鼽方对AR模型大鼠鼻腔黏膜TLR4表达水平及血清IL-4和IFN-γ水平的影响。 方法： 1. 选择肺肾气虚型AR患者为研究对象。将受试者随机分为试验组和安慰剂组，试验组16人，安慰剂组16人。试验组口服摄涕止鼽方（黄芪、白术、防风、肉桂、细辛、干姜、制白附子）清膏治疗，安慰剂组口服安慰剂免煎颗粒治疗，疗程均为28天。在治疗前和治疗第28天对变应性鼻炎整体症状、鼻塞、流涕、喷嚏、鼻痒的严重程度进行VAS评分，并进行RQLQ评分。在治疗前后使用ELISA检测受试者血清IL-4和IFN-γ水平，免疫组化和Western Blot检测下鼻甲黏膜TLR2和TLR4表达水平。 2. 选择清洁级SD大鼠60只为研究对象，随机分成6组，A组（正常组） 10只，B组（空白对照组）10只，C组（AR模型组）10只，D组（AR模型组+LPS）10只，E组（AR模型+中药）10只，F组（AR模型+LPS+中药）10只。AR模型制作：使用卵清蛋白（OVA）+Al（OH）3对大鼠进行腹腔注射，隔天1次，连续7次，作为基础致敏，从实验第15天开始每天以OVA滴鼻，连续7天，激发AR症状，并进行症状积分评估，从实验第22天开始予以低浓度OVA滴鼻，隔天1次，连续9天，维持致敏?A组不施加任何干预?B组以生理盐水代替OVA进行腹腔注射和鼻腔激发?C组按照上述AR模型制作方式造模?D组在制作AR模型的基础上，在实验第22天使用LPS滴鼻，每天1次，连续9天?E组在制作AR模型的基础上，在实验第22天，使用摄涕止鼽方清膏灌胃，每天1次，连续9天?F组在D组的基础上，在实验第22天，使用摄涕止鼽方清膏灌胃，每天1次，连续9天?HE染色观察大鼠鼻中隔黏膜组织形态变化，ELISE检测大鼠血清中IL-4和IFN-γ水平，免疫组化染色观察大鼠鼻中隔黏膜TLR4表达， Western Blot检测大鼠鼻腔外侧壁黏膜TLR4表达水平。 结果： 1. VAS和RQLQ评分：试验组治疗后VAS和RQLQ评分较治疗前降低，安慰剂组治疗后VAS和RQLQ评分较治疗前降低。试验组和安慰剂组治疗前VAS和RQLQ评分比较无显著性差异，试验组和安慰剂组治疗后VAS和RQLQ评分比较无显著性差异。ELISE检测：试验组治疗后血清IL-4水平较治疗前降低?试验组治疗后血清IL-4水平比安慰剂组治疗后血清IL-4水平低。试验组与安慰剂组治疗前后血清IFN-γ比较无显著性差异。免疫组化检测：试验组和安慰剂组治疗前后下鼻甲黏膜均表达TLR2和TLR4。Western Blot检测：安慰剂组治疗后鼻腔黏膜TLR2蛋白表达水平较安慰剂组治疗前升高?试验组治疗后鼻腔黏膜TLR2蛋白表达水较安慰剂组治疗后低?安慰剂组治疗后鼻腔黏膜TLR4蛋白表达水平较安慰剂组治疗前升高? 2. 变应性鼻炎大鼠模型行为学评分均高于5分。模型大鼠鼻中隔黏膜HE染色见单核细胞及嗜酸性粒细胞浸润，LPS滴注大鼠鼻腔后见鼻中隔黏膜有中性粒细胞浸润。ELISE检测：E组血清IL-4水平较C组低，F组血清IL-4水平较D组低。各组血清IFN-γ比较无显著性差异。免疫组化染色：各组鼻中隔黏膜均表达TLR4。Western Blot检测：各组鼻腔外侧壁黏膜TLR4表达水平组间比较无显著性差异。 结论： 1. 肺肾气虚型AR急性发作或加重的自然病程会导致鼻腔黏膜TLR2和TLR4水平升高。 2. 摄涕止鼽方能抑制肺肾气虚型AR患者鼻腔黏膜TLR2和TLR4水平的升高。 3. 摄涕止鼽方能降低肺肾气虚型AR患者血清IL-4水平。 4. AR大鼠模型制作成功。 5. 摄涕止鼽方能降低AR大鼠模型血清IL-4水平。 6. 摄涕止鼽方能降低LPS干预后AR大鼠模型的血清IL-4水平。
变应性鼻炎;摄涕止鼽方;Toll样受体;免疫平衡
成都中医药大学
博士
中医五官科学
彭顺林
2018
中文
R276.1
2019-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）