WSSV极早期蛋白WSV249和WSV403相互作用蛋白的筛选鉴定
对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus，WSSV)是一种杆状型的双链环状DNA病毒，该病毒致病能力强，传播范围广，致死率高，是危害对虾养殖业的主要病原之一。 在病毒感染增殖过程中，病毒极早期蛋白质起着非常关键的调控作用。WSV249，WSV403是WSSV的极早期蛋白，也是E3泛素化连接酶。在前期工作中通过串联亲和纯化和质谱筛选到可能与WSV249或WSV403相互作用的蛋白，包括与WSV403可能互作的蛋白striatin（STRN），Nucleoporin50（NUP50），Serine/threonine-protein phosphatase2A65kDa regulatory subunit A alphaisoform（PPP2R1A），fibroblast growth factor receptor1oncogene partner（FGFR1OP），karyopherin subunit alpha6（KPNA6）；以及与WSV249可能互作的Sequestosome1（SQSTM1）。 在本实验中，克隆表达筛选到的这些人源基因，并在293T细胞中与WSV403或者WSV249共转染。通过免疫共沉淀验证它们与WSV403或者WSV249蛋白的相互作用，证实WSV403可以与KPNA6，PPP2R1A和STRN结合，WSV249可以与SQSTM1结合。为了验证相应的对虾蛋白是否与WSV403或WSV249互作，在凡纳滨对虾中克隆相应的基因，并在293T细胞中与WSV403或者WSV249共转染，然后通过免疫荧光和免疫共沉淀验证对虾蛋白和病毒极早期蛋白之间的互作关系。结果表明对虾STRN蛋白（Lv-striatin-3）与WSV403结合，呈点状共定位于细胞质中。为了解Lv-stritin-3在WSSV感染中的作用，通过RT-PCR进一步分析了Lv-stritin-3的组织分布及随WSSV感染其表达量的改变。结果发现该基因在被检测组织中均有表达，其中在脑中表达量最高；但WSSV感染对其转录水平并没有造成显著影响。
对虾养殖;白斑综合症病毒感染;极早期蛋白;基因筛选;基因鉴定
国家海洋局第三海洋研究所
硕士
海洋生物学
杨丰;李钫
2018
中文
S945.46
88
2018-12-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）