猪瘟病毒E2蛋白配体表位筛选鉴定
猪瘟（Classical swine fever，CSF），又称“烂肠瘟”，是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的临床上以高热稽留、精神极度沉郁和黏膜出现广泛性出血等为主要特征的传染病。因可导致患病猪发烧、厌食、腹泻、死亡，母猪流产或死胎而成为猪病中危害最大、流行最广的传染病之一。CSFV属于黄病毒科、瘟病毒属，单股正链RNA，有囊膜，病毒粒子为40-60nm，基因组长约12.3kb。E1、E2和Erns是CSFV的三种主要结构蛋白，与病毒的吸附和侵入靶细胞有关。E2蛋白位于CSFV囊膜表面，参与病毒的感染过程，是CSFV的主要保护性抗原蛋白之一。CSFV表面的单抗决定簇主要分布在A、B、C、D 4个抗原结构域，这4个抗原区都位于E2 NH2-端690~866氨基酸残基之间。筛选CSFV E2蛋白配体表位，对进一步研究CSFV具有重大意义。 试验通过对疑似CSFV的组织病料进行RNA提取、PCR扩增，对CSFV阳性病毒注射兔体进行免疫交互试验。将阳性CSFV接种PK-15细胞，用IPMA方法检测病毒增殖情况，并测定其TCID50。用DNASIS（Ver. 2.5）软件分析CSFV E2蛋白的氨基酸序列，分析多肽的一级结构、二级结构、亲水性等特性，设计合成7条多肽分别命名为SE21、SE22、SE231、SE232、SE241、SE242、SE03，CP为无关多肽，均标记FITC荧光。通过细胞结合试验、病毒阻断试验、多肽抑制试验等，利用流式细胞仪、IFA、IPMA等方法筛选与PK-15细胞结合率较高的CSFV配体表位。 试验结果显示：本实验室保存的疑似CSFV病料接种PK-15细胞后，检测其TCID50，结果为104.5/mL。按免疫程序对健康家兔进行免疫，加强免疫后7天心脏采血，制备兔抗CSFV高免血清，间接ELISA方法测定血清效价1：6400。通过细胞结合试验、病毒阻断试验、多肽抑制试验等，利用流式细胞仪、IPMA等方法筛选出与PK-15细胞结合CSFV配体表位，SE241和SE242。荧光强度分别为75.5和82.2 。结果显示，多肽SE241和多肽SE242能有效地抑制CSFV感染PK-15细胞。 本研究筛选出CSFV E2蛋白上与PK-15细胞结合率较高的多肽，通过功能鉴定，筛选出的多肽可以有效地抑制CSFV感染PK-15细胞。提示该多肽可以作为预防和治疗猪瘟的理想药物靶标之一，为进一步研制新型的抗病毒药物奠定了基础。同时也为进一步研究猪瘟配体表位和多肽疫苗的生产应用奠定基础。
猪瘟病毒;E2蛋白;配体表位;免疫交互
河南科技学院
硕士
预防兽医学
银梅
2018
中文
S852.651
69
2018-12-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）