黄芩苷、青藤碱、吉马酮对THP-1细胞TLR8调节作用研究
目的： 因TLR8是参与抗病毒天然免疫应答和特异性免疫应答反应的重要受体之一，而关于中药对TLR8调节作用机制方面的探索研究甚少。故本课题选择已报道的抗炎抗病毒中药单体：黄芩苷、青藤碱、吉马酮、白花丹醌、没食子酸进行筛选研究。本课题主要目标是初步探讨黄芩苷、青藤碱等中药单体是否能通过调节TLR8发挥免疫作用，将为研究抗炎抗病毒中药的作用机制奠定基础。 方法： （1）采用密度梯度离心法分离正常人外周血单个核细胞（PBMC），并以黄芩苷、青藤碱、吉马酮、白花丹醌、没食子酸、R848（TLR7/8刺激剂）分别刺激PBMCs12h和24h，以RT-PCR方法检测TLR8 mRNA表达，从中筛选出对TLR8有调节作用的中药单体。 （2）通过CCK-8法测定THP-1细胞活力，探讨筛选的黄芩苷、青藤碱、吉马酮对其活力的影响，筛选最佳的浓度范围。 （3）荧光定量PCR检测黄芩苷、青藤碱、吉马酮对THP-1细胞和人PBMCs TLR8mRNA表达的差异。ELISA法检测TLR8下游细胞因子ELISA法检测THP-1细胞TLR8下游细胞因子IL-12、IL-6的表达水平。 结果： （1）黄芩苷作用12h（P<0.05）、吉马酮作用24h（P<0.001）对人PBMCs TLR8mRNA表达有上调作用；青藤碱能显著降低R848刺激人PBMCs后的TLR8 mRNA的上调表达。白花丹醌、没食子酸无显著作用（ P>0.05）。从中筛选出黄芩苷、青藤碱、吉马酮这三种对正常人PBMCsTLR8有调节作用的中药单体。 （2）CCK8法实验结果表明，青藤碱、黄芩苷药物浓度为400μmol/L及吉马酮药物浓度维持在200μmol/L以下时对 THP-1细胞的活性影响较小。 （3）黄芩苷对THP-1细胞、人PBMCs后的TLR8表达有上调作用（P<0.05），高剂量时对IL-12、IL-6有下调作用（P<0.05）；吉马酮对THP-1细胞、人PBMCs后的TLR8、IL-12表达有上调作用（P<0.01），高剂量时对IL-6有下调作用（P<0.05）；青藤碱能显著降低R848刺激THP-1细胞和人PBMCs后的TLR8、IL-12、IL-6的上调表达（P<0.01）。 结论： 青藤碱、黄芩苷、吉马酮对THP-1细胞、人PBMCs TLR8有调节作用。青藤碱能显著降低R848刺激THP-1细胞、人PBMCs后的TLR8上调表达；黄芩苷、吉马酮对THP-1细胞、人PBMCs后的TLR8表达有上调作用，但其同时也影响其他受体如TLR4，TLR4和TLR8共同下游因子IL-6、IL-12等表达降低，说明黄芩苷可能是通过其他途径影响TLR8来参与对人天然免疫能力的调节。吉马酮通过上调THP-1细胞的TLR8表达，进而促进IL-12的分泌及抑制IL-6的分泌，说明吉马酮的抗炎作用可能与其对TLR8表达影响的关系较小。
黄芩苷;青藤碱;吉马酮;TLR8受体;THP-1细胞
广西中医药大学
硕士
药理学
冷静
2017
中文
R282.710.5
91
2019-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）