吴茱萸不同炮制品对肝脏毒性的影响及其减毒机制研究
目的： 探讨吴茱萸不同炮制品对肝脏毒性的影响及其减毒机制研究。 方法： 1.参照2015年版《中国药典》，检测吴茱萸不同炮制品中的指标性成分含量，水分、浸出物是否达标。2.体外-以人正常肝细胞系L02细胞为研究对象，采用 CCK-8法检测吴茱萸不同炮制品对 L02细胞活性的影响；采用倒置显微镜观察细胞形态学改变，并测定细胞培养上清液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量，计算SOD/MDA；采用Hoechst荧光染色法检测细胞凋亡。3.体内-将昆明小鼠随机分为正常组和吴茱萸不同炮制品组（生吴茱萸、甘草制吴茱萸及盐吴茱萸），各炮制品又分为3个不同剂量组，以6.5 g·kg-1、3.25 g·kg-1、0.65 g·kg-1连续ig5d、10d、15d后处理，检测血清中ALT、AST、LDH和碱性磷酸酶（AKP）的活性，并计算肝、肾脏器指数，光学显微镜下观察肝组织形态变化；检测ig15d后各组小鼠肝组织中SOD活性、MDA含量及肝脏线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性；采用ELISA法测定肝组织中炎症介质肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）水平；采用免疫组化法测定肝组织中Bcl-2、Bax蛋白表达。 结果： 1.吴茱萸不同炮制品中指标性成分测定： HPLC法测得吴茱萸不同炮制品中的柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的含量均符合2015年版《中国药典》，且含水量均未超过15.0%，浸出物含量均超过30.0%。 2.体外实验结果显示： 与Control组比较，阳性药组、生吴茱萸组可明显降低L02细胞的活性（P＜0.01）与形态，显著增加L02细胞的凋亡形态，显著升高L02细胞培养上清液中ALT、AST、LDH活力及MDA含量（P＜0.05或P＜0.01），显著降低L02细胞培养上清液中SOD活力（P＜0.05或P＜0.01）；与生吴茱萸组比较，甘草制吴茱萸组、盐吴茱萸组可显著降低对 L02细胞的增殖抑制作用（P＜0.01）与形态变差的趋势，显著减轻L02细胞的凋亡形态，显著降低L02细胞培养上清液中ALT、AST、LDH活力及MDA含量（P＜0.05或P＜0.01），显著升高L02细胞培养上清液中SOD活力（P＜0.05或P＜0.01）。吴茱萸各炮制品体外对L02细胞的毒性作用顺序为：生吴茱萸>甘草制吴茱萸>盐吴茱萸。 3.体内实验结果显示： 与正常组比较，生吴茱萸组可显著升高小鼠肝、肾脏器指数（P＜0.05或 P＜0.01），显著增加肝组织病理损伤程度，显著升高小鼠血清中 ALT、AST、LDH、AKP的含量（P＜0.05或 P＜0.01），显著降低小鼠肝脏线粒体Na+-K+-ATP、Ca2+-ATP活力（P＜0.05或P＜0.01），显著降低小鼠肝组织中SOD活力，显著升高小鼠肝组织中MDA含量（P＜0.01），显著升高小鼠肝组织中TNF-α、IL-1β表达水平（P＜0.01），明显减少小鼠肝细胞胞浆及核膜中 Bcl-2的免疫阳性细胞数百分比，显著增加Bax的免疫阳性细胞数百分比（P＜0.05或P＜0.01）；与生吴茱萸组比较，甘草制吴茱萸组、盐吴茱萸组可明显降低小鼠肝、肾脏指数（P＜0.05或P＜0.01），降低肝组织病理损伤程度，显著降低小鼠血清中 ALT、AST、LDH、AKP的含量（P＜0.05或 P＜0.01），显著升高小鼠肝脏线粒体Na+-K+-ATP、Ca2+-ATP活力（P＜0.05或P＜0.01），显著升高小鼠肝组织中SOD活力，显著降低小鼠肝组织中MDA含量（P＜0.01），显著降低小鼠肝组织中TNF-α、IL-1β表达水平（P＜0.01），明显增加小鼠肝细胞胞浆及核膜中 Bcl-2的免疫阳性细胞数百分比，显著减少Bax的免疫阳性细胞数百分比（P＜0.05或P＜0.01）。肝、肾脏指数和病理形态学的改变具有时间依赖性，吴茱萸各炮制品致小鼠肝毒性的作用顺序为：生吴茱萸>甘草制吴茱萸>盐吴茱萸。 结论： 1.吴茱萸不同炮制品在体内外对肝脏均具有肝毒性作用，炮制可以降低其体内外肝毒性作用。 2.吴茱萸炮制后降低肝毒性的机制可能与自由基、炎症因子的减少、氧化应激损伤程度减轻及细胞凋亡的下降有关。
吴茱萸;中药炮制;肝脏毒性;减毒机制
广西中医药大学
硕士
药理学
钟振国
2017
中文
R282.71
89
2019-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）