安肠汤对溃疡性结肠炎大鼠肠道菌群变化的影响
目的： 本研究旨在通过应用实时荧光定量技术（ Real-time Quantitative polymerase chain reaction， qPCR）对溃疡性结肠炎（Ulcerative clitis,UC)大鼠16种与肠道疾病相关联的菌属变化进行对比研究，分析中医经验方安肠汤对UC大鼠肠道菌群变化影响，探索UC大鼠的肠道菌群变化特征，为揭示安肠汤治疗UC的作用机制和安肠汤的临床应用及推广提供理论依据，同时也为加深对UC疾病认识和全面了解UC肠道菌群变化情况提供基础。 方法： （1）实验分组：将112只健康大鼠随机分为UC模型组、正常对照组、美沙拉嗪组、丽珠肠乐组、安肠汤低剂量组、安肠汤中剂量组和安肠汤高剂量组，每组各16只。 （2）实验造模：采用2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitro-benzene-sulfonicacid,TNBS）/乙酸造模法对除正常对照组以外的各组进行造模，在造模后第10天开始对各组大鼠进行灌胃，灌胃7天后处死大鼠并取材。 （3）实验对象：各组大鼠及其粪便和结肠组织。 （4）实验方法及检测内容：实验期间观察大鼠活动饮食等一般情况，及大鼠粪便性状及有无隐血情况，进行疾病活动指数（ disease activity index,DAI）评分；取大鼠黏膜组织进行病理分析，以结肠损伤指数（colon macroscopic damage index,CMDI）评判大鼠黏膜损伤情况，Geboes指数评价结肠黏膜组织病理学情况；取病变部位结肠内容物以试剂盒提取粪便细菌基因组DNA，采用SYBRGreen荧光染料法对提取物进行各菌属实时荧光定量PCR检测，各组菌属含量采用Delta-delta Ct相对定量法定量并制作柱状图直观分析。 结果： （1）各组大鼠疾病症状表现：UC模型组出现明显UC疾病症状表现，DAI评分较正常对照组升高（p<0.05）；各治疗组（美沙拉嗪组、丽珠肠乐组、安肠汤高、中、低剂量组）在灌胃后均出现不同程度的症状缓解，DAI评分低于UC模型组（p<0.05），安肠汤中剂量组低于高剂量组和低剂量组（p<0.05），各治疗组灌胃第7天DAI评分低于第4天（p<0.05），安肠汤中剂量组在灌胃第7天的DAI评分较美沙拉嗪组和丽珠肠乐组更低（p<0.05）。 （2）各组大鼠结肠组织状况：在CMDI和Geboes评分上，UC模型组均高于正常对照组（p<0.05），各治疗组较UC模型组出现下降（p<0.05），安肠汤中剂量组低于高、低剂量组（ p<0.05），同时低于丽珠肠乐组（p<0.05），高于美沙拉嗪组（p<0.05）。 （3）UC模型组大鼠肠道菌群变化：与正常对照组相比，UC模型组在乳酸杆菌、双歧杆菌、梭菌属、脆弱拟杆菌属、单形拟杆菌、多形拟杆菌、卵形拟杆菌、普通拟杆菌中相对表达含量降低（p<0.05），在拟杆菌属、梭杆菌属、肉毒杆菌、艰难杆菌、吉氏拟杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、大肠杆菌中则相对表达含量升高(p<0.05)。 （4）美沙拉嗪组和丽珠肠乐组大鼠肠道菌群变化：与UC模型组相比，美沙拉嗪组和丽珠肠乐组在乳酸杆菌、双歧杆菌、梭菌属、脆弱拟杆菌属、多形拟杆菌、卵形拟杆菌、普通拟杆菌中相对表达含量升高（p<0.05）；在单形拟杆菌中，美沙拉嗪组较UC模型组相对表达含量升高（p>0.05），丽珠肠乐组较UC模型组相对表达含量升高（p<0.05）；在梭杆菌属、肉毒杆菌、艰难杆菌、吉氏拟杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、大肠杆菌中美沙拉嗪组与丽珠肠乐组在相对表达含量较UC模型组降低（p<0.05）；在拟杆菌属中，美沙拉嗪组较UC模型组降低（p>0.05），丽珠肠乐组较UC模型组降低（p<0.05）。 （5）安肠汤各组（安肠汤低、中、高剂量组）大鼠肠道菌群变化情况：安肠汤各组与UC模型组相比在乳酸杆菌、双歧杆菌、梭菌属、脆弱拟杆菌属、多形拟杆菌、卵形拟杆菌、普通拟杆菌中相对表达含量升高（p<0.05）；在梭杆菌属、肉毒杆菌、艰难杆菌、吉氏拟杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、大肠杆菌中表达含量降低（p<0.05）；在单形拟杆菌中安肠汤低剂量组较UC模型组升高（p>0.05），中剂量组和高剂量组较UC模型组升高（p<0.05）。 （6）安肠汤各组大鼠肠道菌群变化组间对比情况：安肠汤中剂量组在乳酸杆菌、双歧杆菌、梭杆菌属、脆弱拟杆菌、单形拟杆菌、多形拟杆菌、肉毒杆菌、普通拟杆菌、艰难杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、大肠杆菌较其他两组更接近空白对照组(p<0.05)，高剂量组在拟杆菌属、梭菌属、卵形杆菌、吉氏拟杆菌则较其他两组更接近(p<0.05)。 （7）安肠汤中剂量组与美沙拉嗪组和丽珠肠乐丽珠肠乐组肠道菌群变化情况对比：安肠汤中剂量组的相对表达含量在乳酸杆菌、脆弱拟杆菌、吉氏拟杆菌中较丽珠肠乐组更接近空白对照组(p<0.05)，在双歧杆菌、梭菌属、单形拟杆菌、肉毒杆菌中较美沙拉嗪组更接近空白对照组(p<0.05)，在大肠杆菌、屎肠球菌、粪肠球菌、艰难杆菌、普通拟杆菌、卵形杆菌、多形拟杆菌和拟杆菌属中的相对表达含量较美沙拉嗪组和丽珠肠乐组均更接近空白对照组(p<0.05)。 结论： （1）本实验UC大鼠模型在疾病症状、结肠损伤和病理表现上均与UC疾病表现相贴合，UC大鼠模型建立较为成功，安肠汤和美沙拉嗪、丽珠肠乐对UC大鼠具有治疗或缓解作用。 （2）中剂量安肠汤在疾病症状改善和结肠损伤修复上均优于高低剂量，同时在长效治疗上对症状缓解的程度优于美沙拉嗪和丽珠肠乐，对结肠损伤的修复作用虽不及美沙拉嗪，但较丽珠肠乐更佳。 （3）UC大鼠肠道菌群变化具有明显差异性和特征性，这种变化可能在UC的发病中起到一定作用，同时这种菌群变化或可作为UC的诊断标志； （4）安肠汤对UC大鼠总体肠道菌属具有明显的调节作用，并在总体上与美沙拉嗪和丽珠肠乐具有一致性，安肠汤对UC肠道菌群的调控作用可能是其治疗UC的作用机制； （5）安肠汤中剂量相较高剂量和低剂量对UC大鼠肠道菌群具有更显著的调节作用，同时对大肠杆菌、屎肠球菌、粪肠球菌、艰难杆菌、普通拟杆菌、卵形杆菌、多形拟杆菌和拟杆菌属的调节作用以优于美沙拉嗪和丽珠肠乐，提示我们无论从缓解症状、还是结肠损伤修复、以及肠道菌群调节作用角度考虑，提高目前安肠汤临床应用剂量可能会取得更佳效果。
安肠汤;溃疡性结肠炎;肠道菌群;实时荧光定量PCR
广西中医药大学
硕士
中医外科学
孙平良
2017
中文
R259;R574.62
120
2019-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）