非编码RNA在肺腺癌中的筛选和功能机制研究
目的：1、检测circRNA hsa_circ_0017562在肺腺癌组织及正常肺组织中表达水平的差异，探索 hsa_circ_0017562成为肺腺癌潜在诊断标志物的可能性。2、检测microRNA miR-423-5p对肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响，探索 miR-423-5p成为肺腺癌潜在治疗靶点的可能性。 方法：1、收集2013年1月至2015年12月的肺腺癌组织和配对的癌旁正常肺组织石蜡标本36对。提取 RNA后，利用实时荧光定量 PCR技术检测hsa_circ_0017562在肺腺癌组织和正常肺组织中的表达水平。结合36例患者的临床病理特征，分析肺腺癌中 hsa_circ_0017562表达的临床病理意义。2、培养A549、NCI-H1299、NCI-H157、A973及 GLC-82五种肺腺癌细胞株，利用实时荧光定量PCR技术检测miR-423-5p在5种肺腺癌细胞株的表达情况。向miR-423-5p低表达的细胞株瞬时转染miR-423-5p mimics进行过表达，向miR-423-5p高表达的细胞株瞬时转染miR-423-5p inhibitor进行敲低表达。利用实时荧光定量PCR检测转染效果。采用 MTS、平板克隆实验检测转染后各组细胞增殖能力的变化。利用迁移小室、侵袭小室检测转染后细胞迁移、侵袭能力的变化。 结果：1、 hsa_circ_0017562在肺腺癌组织中的表达含量（4.82±0.55）明显低于正常肺组织（8.81±1.61），差异有统计学意义（P＜0.05）。肺腺癌组织中hsa_circ_0017562的表达含量在临床分期、吸烟史、胸膜是否受侵等分组中未见明显差异，在性别组中差异明显（P＜0.05）。2、 miR-423-5p在 A549、NCI-H1299、NCI-H157、A973及 GLC-82细胞中的表达含量分别为0.92、0.88、0.22、0.19、0.47。RT-qPCR结果显示，转染miR-423-5p inhibitor的A549细胞miR-423-5p表达量（0.17±0.05）显著低于对照组（0.91±0.06），达到敲低表达效果。转染 miR-423-5p mimics的 A973细胞 miR-423-5p表达量（1.22±0.13）显著高于对照组（0.19±0.07），达到过表达效果。MTS实验结果显示，敲低 miR-423-5p的 A549细胞增殖活力在24h、48h、72h、96h明显低于对照组；过表达 miR-423-5p的A973细胞增殖活力在24h、48h、72h、96h明显高于对照组。平板克隆实验结果显示，敲低 miR-423-5p的 A549细胞克隆数（126±28）低于对照组（407±23）；过表达 miR-423-5p的 A973细胞克隆数（535±23）高于对照组（385±38）。Transwell迁移实验结果显示，敲低 miR-423-5p的 A549细胞穿过迁移小室的细胞数（89±16）低于对照组（143±25）；过表达 miR-423-5p的A973细胞穿过迁移小室的细胞数（223±30）高于对照组（154±35）。Transwell侵袭实验结果显示，敲低 miR-423-5p的 A549细胞穿过侵袭小室的细胞数（83±14）低于对照组（117±20）；过表达 miR-423-5p的 A973细胞穿过侵袭小室的细胞数（192±27）高于对照组（133±28）。上述结果差异均具有统计学意义（P＜0.01），提示miR-423-5p对肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭起正向调控作用。 结论：1、 hsa_circ_0017562在肺腺癌组织中的表达水平显著低于正常肺组织，是成为肺腺癌诊断的潜在分子标记物。2、 miR-423-5p可以正向调控肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，是成为肺腺癌治疗的潜在分子靶点。
肺腺癌;诊断标志物;侵袭能力;治疗靶点;非编码RNA
华北理工大学
硕士
肿瘤学
胡万宁;孙国贵
2017
中文
R734.2;R730.5
63
2019-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）