miR-615-3p在胃癌中的促癌作用及分子机制研究
目的：探讨miR-615-3p在胃癌组织和血清中的表达水平及对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及化疗耐药的影响，确定miR-615-3p的靶基因以及靶基因对胃癌细胞的作用。 方法： 1.qRT-PCR法检测miR-615-3p在临床胃癌组织（低分化和中高分化）及相应血清标本中的表达水平；对胃癌患者的临床病理资料汇总后分析胃癌组织中miR-615-3p水平与临床病理因素（性别、年龄、病理分化类型及TNM分期）的关系；通过SPSS软件分析胃癌患者和健康体检者血清中miR-615-3p值切点，绘制ROC曲线，分析miR-615-3p区分胃癌和健康人群的诊断临界点，敏感度及其特异度。 2.胃癌细胞系MGC-803中分别过表达和封闭miR-615-3p，于24h后采用CCK-8实验、Transwell实验检测各组胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力；应用免疫细胞化学法和western blot法检测各组细胞中上皮标志物E-cadherin和间质标志物N-cadherin、Vimentin蛋白的表达水平；24h后添加不同浓度奥沙利铂，48h后采用CCK-8实验检测细胞活性变化。 3.采用qRT-PCR和western blot实验分别检测miR-615-3p的靶基因B4GALT1在胃癌组织与胃癌细胞系中的mRNA和蛋白水平；在MGC-803细胞中分别过表达和敲降B4GALT1，于24h后采用CCK-8实验、Transwell实验检测各组胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力；应用免疫细胞化学法和western blot法检测各组细胞中E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白的表达水平；24h后添加不同浓度奥沙利铂，48h后采用CCK-8实验检测细胞的活性变化。 结果： 1.miR-615-3p在低分化胃癌组中的表达水平显著高于良性病变组及中高分化胃癌组（P<0.01）；而在中高分化胃癌组的表达水平与良性病变组比较差异无统计学意义（P>0.05）。miR-615-3p在胃癌组织中的表达水平与患者的性别、年龄无明显关系（P>0.05），与其病理分化类型和 TNM分期相关，其中低分化胃癌患者的表达水平明显高于中高分化者（P<0.01），III/IV期的相对表达水平明显高于I/II期（P<0.05）；另一方面，miR-615-3p在低分化和中高分化胃癌血清组的表达水平均显著高于健康体检组（P<0.01），低分化胃癌血清组的表达水平显著高于中高分化胃癌血清组（P<0.01）。血清中miR-615-3p的 ROC曲线下面积为0.803［95% CI（0.707，0.906）］，与A=0.5比较，差异有统计学意义。区分胃癌和健康人群的诊断临界点为35.32，敏感度为85.71%、特异度为68.57%。提示miR-615-3p可能作为辅助诊断胃癌的生物学指标具有可行性。 2.与对照组相比，封闭miR-615-3p组的细胞增殖能力显著减弱（P<0.05，P<0.01），穿过基底膜（无基质胶及含基质胶）的细胞数均显著降低（P<0.01），封闭miR-615-3p组E-cadherin、N-cadherin及Vimentin的蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结果证明，miR-615-3p可正向调控MGC-803细胞的增殖、迁移与侵袭能力。奥沙利铂处理封闭miR-615-3p的MGC-803细胞48h后，细胞的增殖能力显著弱于对照组（P<0.01）。提示miR-615-3p可负向调控胃癌细胞对奥沙利铂药物的敏感性。 3.B4GALT1在低分化胃癌组织中的mRNA和蛋白表达水平显著高于良性病变组（P<0.01）；B4GALT1在过表达miR-615-3p的MGC-803细胞组中mRNA表达水平明显高于对照组（P<0.05），蛋白表达水平也同样显著高于对照组（P<0.01）；在封闭miR-615-3p的MGC-803细胞组中的mRNA表达水平显著低于对照组（P<0.01），蛋白表达水平同样也显著低于对照组（P<0.01）。以上结果表明，miR-615-3p在胃癌中可正向调控B4GALT1的表达。与对照组相比，敲降B4GALT1组的细胞增殖能力明显减弱（P<0.05，P<0.01），穿过基底膜（无基质胶及含基质胶）的细胞数均显著降低（P<0.01）；敲降B4GALT1组的E-cadherin、N-cadherin及Vimentin的蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结果证明，B4GALT1可正向调控MGC-803细胞的增殖、迁移与侵袭能力；奥沙利铂处理B4GALT1敲降的MGC-803细胞48h后，细胞的增殖能力显著弱于对照组（P<0.05，P<0.01）。提示B4GALT1可负向调控细胞对奥沙利铂的药物敏感性。 结论： 1.miR-615-3p及其靶基因B4GALT1在胃癌组织中的表达水平显著高于良性病变组织，在胃癌中的表达水平与其病理分化类型和TNM分期呈正相关； 2.miR-615-3p可能通过正向调控 B4GALT1促进胃癌细胞MGC-803的增殖、迁移和侵袭，增强细胞的化疗耐药性。
胃癌;侵袭转移;化疗耐药;miR-615-3p;4-半乳糖基转移酶;促癌作用
华北理工大学
硕士
病原生物学
章广玲;李玉凤
2017
中文
R735.2;R73-37
62
2019-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）