Ac-SDKP调节ACE2-Ang(1-7)-Mas轴抑制矽肺纤维化的作用机制
目的：研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,Ac-SDKP）通过调节血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ACE）2-血管紧张素（angiotensin，Ang）(1-7)-Mas轴，抑制大鼠矽肺纤维化的作用及其机制。 方法：采用非暴露式支气管灌注SiO2制作大鼠矽肺纤维化动物模型，实验分组为：正常4周组（control4w,C4）、矽肺4周组（silicosis4w,S4）、正常8周组（control8w,C8）、矽肺8周组（silicosis8w,S8）、Ac-SDKP前处理组（Ac-SDKP pre-treatment,Ac-pre）及Ac-SDKP后处理组（Ac-SDKP post-treatment,Ac-post）。体外原代培养大鼠肺成纤维细胞，采用Ang II诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化，实验分组为：对照组（control,C）、Ang II诱导组（Ang II）、给予Ac-SDKP（Ang II+Ac-SDKP）、Ang(1-7)（Ang II+Ang(1-7)）及其Mas受体抑制剂A779干预组（Ang II+Ac-SDKP+A779,Ang II+Ang(1-7)+A779）。HE染色、VG染色观察肺组织病理形态；免疫组织化学染色法检测ACE2、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）的定位表达；酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测大鼠血浆中Ang(1-7)的表达变化情况；采用免疫细胞荧光化学染色法检测Ang(1-7)及α-SMA的共定位表达；采用western blot法检测肺组织及肺成纤维细胞ACE2、Ang(1-7)、Mas、α-SMA及I型胶原蛋白的表达情况。 结果： 1.HE染色结果显示，C4、C8组肺泡结构清晰，壁薄；S4组可见孤立的细胞性矽结节形成，伴有炎细胞浸润，S8组可见矽结节融合，VG染色胶原大量沉积。Ac-pre及Ac-post组矽结节数量和面积较S8组明显减少，伴有胶原沉积程度减弱。 2.免疫组织化学染色结果显示，α-SMA阳性表达于矽结节及间质纤维化区域；ACE2阳性表达于正常肺泡上皮细胞，而在矽肺结节及间质纤维化区域表达减弱或缺失。Western blot结果显示，与C4、C8组相比较，S4、S8组α-SMA、I型胶原蛋白表达水平明显上调，而ACE2、Ang(1-7)和Mas蛋白表达下调；与S8组相比较，Ac-post及Ac-pre组α-SMA和I型胶原表达下调，而ACE2、Ang(1-7)和Mas蛋白表达上调。 3.ELISA检测的大鼠血浆中Ang(1-7)的表达水平S4组降低为C4组的62.92%，S8组降低为C8组的57.30%，Ac-pre和Ac-post组分别上调为S8组的1.60倍、1.68倍（P＜0.05）。 4.免疫荧光结果显示，与对照组相比，AngII诱导组中α-SMA表达增强，Ang(1-7)表达减弱。与Ang II诱导组比较，给予Ac-SDKP、Ang(1-7)干预α-SMA表达减弱，Ang(1-7)表达增强；与Ac-SDKP、Ang(1-7)干预组相比，给予Mas受体抑制剂A779干预组中α-SMA表达增强，Ang(1-7)表达减弱。 5.Westernblot结果显示，与对照组相比较，Ang II诱导组α-SMA及 I型胶原蛋白表达升高，ACE2、Ang(1-7)、Mas蛋白表达下降；给予Ac-SDKP、Ang(1-7)预处理，ACE2、Ang(1-7)、Mas蛋白表达升高，而α-SMA及I型胶原蛋白表达下降；给予A779处理组可抑制Ac-SDKP、Ang(1-7)相关效应。 结论： 1.ACE2-Ang(1–7)-Mas轴参与了矽肺纤维化的发生、发展。 2.Ac-SDKP通过调节ACE2-Ang(1–7)-Mas轴发挥抑制大鼠矽肺纤维化作用。 3.Ac-SDKP通过Mas受体蛋白发挥抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的作用。
矽肺纤维化;Ac-SDKP调节;I型胶原蛋白;血管紧张素转换酶;2-血管紧张素;成纤维细胞转化;动物模型
华北理工大学
硕士
病理学与病理生理学
杨方;徐洪
2017
中文
R135.2;R563.302
68
2019-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）