PARP-1蛋白调节ZO-2参与氢醌诱导TK6细胞凋亡
目的： 1.探讨氢醌（HQ）诱导细胞凋亡过程中PARP-1的作用。 2.探讨HQ诱导细胞凋亡过程中ZO-2表达变化的机制。 方法： 1.以人正常淋巴母细胞TK6细胞和PARP-1沉默TK6细胞为工具细胞，10μM HQ或溶剂对照PBS处理72 h，流式细胞术检测细胞凋亡，cell counter读取细胞数目，蛋白免疫印迹技术检测PARP-1和ZO-2表达，qRT-PCR检测ZO-2 mRNA水平，相关萤光探针试剂盒检测Caspase-3/7活力和ATP水平，荧光探针试剂盒检测ROS水平，免疫荧光激光共聚焦检测PARP-1与ZO-2和PAR与ZO-2共定位。 2.以10μM HQ处理TK6细胞72 h，在第24 h加入5μM5-AZA共处理48 h或在第48 h加入200 nM TSA共处理24 h，qRT-PCR检测ZO-2 mRNA水平， MSPCR检测ZO-2启动子甲基化水平；HQ和5-AZA或TSA共处理TK6细胞和PARP-1沉默TK6细胞，检测ZO-2 mRNA水平。 结果： 1.沉默PARP-1抑制HQ诱导凋亡 2.沉默PARP-1激活Bcl-2，减少ROS，节省ATP 3. ZO-2定位于细胞核，被PARP-1聚ADP核糖基化修饰 4. HQ使ZO-2启动子甲基化水平增高，mRNA水平降低 5.5-AZA或TSA逆转HQ所致ZO-2启动子甲基化水平增高，恢复mRNA水平 6. PARP-1沉默与5-AZA或TSA改变ZO-2 mRNA水平 结论： 1. PARP-1蛋白通过改变Bcl-2、ROS和ATP水平以及聚ADP核糖基化修饰ZO-2蛋白参与HQ诱导凋亡 2. HQ诱导ZO-2 mRNA改变与其启动子甲基化水平有关 3. PARP-1可能与DNMTs-HDACs共同参与HQ诱导ZO-2 mRNA水平调节。
氢醌;细胞凋亡;DNA甲基化;PARP-1蛋白
广东医科大学
硕士
临床流行病学
唐焕文;刘林华
2017
中文
R329.2
59
2018-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）