miR-3162-3pmimic诱导OVA致敏小鼠炎症反应的作用研究
【目的】 本课题组在前期的临床研究及动物实验基础上发现 miR-3162-3p在哮喘患者体内及急性哮喘小鼠体内均特异性上调，并证实了miR-3162-3p可靶向结合在CTNNB1-mRNA3’ UTR区域，降低miR-3162-3p的靶基因CTNNB1和CTNNB1编码的蛋白β-catenin的表达。为了进一步研究miR-3162-3p的生物学功能，本实验在未致敏和OVA致敏小鼠模型上腹腔注射miR-3162-3p mimic（人工合成的核酸类似物），探讨miR-3162-3p mimic在未致敏和致敏小鼠炎症反应的作用。 【方法】 1.采用16只 SPF级 BALB/c小鼠（20±2g），第0，1，2天注射药物，根据是否腹腔注射miR-3162-3p mimic及其注射药物浓度不同，分为对照组（腹腔注射5%葡萄糖）、2mg/kg组（miR-3162-3p mimic2mg/kg）、4mg/kg组和8mg/kg组。采用 qRT-PCR技术检测肺组织miR-3162-3p的表达水平，HE染色鉴定肺组织中炎症细胞浸润程度，瑞氏染色对肺泡灌洗液（BALF）进行白细胞分类计数，ELISA检测测肺组织炎症因子表达。 2.采用24只 SPF级 BALB/c小鼠（20±2g），第0，7，14天进行OVA腹腔致敏，第21，22，23天进行腹腔注射药物处理。根据是否腹腔致敏和腹腔注射miR-3162-3p mimic，分为对照组、未致敏+miR-3162-3p mimic4mg/kg组（以下简称未致敏+mimic组）、致敏组、致敏+mimic组。取材后，通过qRT-PCR、ELISA及肺泡灌洗液细胞分类等技术，进一步探讨miR-3162-3p mimic对致敏小鼠肺部炎症的影响。 【结果】 1．对未致敏小鼠腹腔注射不同浓度的miR-3162-3p mimic结果显示：①腹腔注射miR-3162-3p mimic浓度越高，BALF细胞总数相应地增高（P<0.01），但各组的细胞分类没有区别；②随着腹腔注射miR-3162-3p mimic浓度的增高， qRT-PCR测得肺组织miR-3162-3p的表达水平也相应增高(P<0.01），但CTNNB1表达水平各组没有区别；③ ELISA结果显示：4mg/kg和8mg/kg组肺匀浆IL-4及TGF-β1表达水平分别较对照组及2mg/kg组增高，具有统计学差异（P<0.01）；④肺组织病理切片HE染色显示：随着腹腔注射miR-3162-3p mimic浓度增高，肺组织炎症细胞浸润也相应增高。 2．对OVA致敏小鼠腹腔注射miR-3162-3p mimic结果显示：① qRT-PCR技术显示：未致敏+mimic组和致敏+mimic组miR-3162-3p的表达水平较对照组、致敏组明显增高(P<0.001）。未致敏+mimic组和致敏+mimic组的CTNNB1的表达水平较对照组及致敏组降低(P<0.05）；②未致敏+mimic组和致敏+mimic组BALF细胞总数较对照组及致敏组增高（P<0.05），未致敏+mimic组和致敏+mimic组细胞分类以巨噬细胞为主（P<0.05）；③ ELISA结果显示：未致敏+mimic组和致敏+mimic组肺匀浆IL-4表达水平较对照组及致敏组增高（P<0.001）；④肺组织病理切片显示：未致敏+mimic组和致敏+mimic组肺组织炎症细胞浸润水平较对照组增高。 【结论】 腹腔注射miR-3162-3p mimic浓度越高，未致敏小鼠肺部炎症反应越明显，但各组的CTNNB1的表达水平各组没有区别；在致敏小鼠模型上，致敏可介导CTNNB1的表达，另一方面，miR-3162-3p mimic可下调小鼠肺组织CTNNB1表达水平。
哮喘;miR-3162-3p;β-catenin蛋白;炎症反应
广东医科大学
硕士
儿科学
谭建新
2017
中文
R725.6;R562.25
54
2018-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）