不同期哮喘儿童外周血miR-3162-3P和β-catenin蛋白表达水平变化及意义
【目的】 本课题组已经从细胞水平以及动物水平上证实了 miR-3162-3P与哮喘相关。并通过信息学技术筛查出CTNNB1-mRNA为相关靶基因本，CTNNB1-mRN A编码β-catenin蛋白，并在细胞水平及动物水平上证实了miR-3162-3P能靶向下调CTNNB1-mRNA的表达。miR-3162-3P模拟物能靶向下调CTNNB1-mRNA，诱导炎症因子的释放，加重支气管哮喘炎症反应。研究通过采集正常儿童，哮喘儿童和已经接受规律治疗的哮喘儿童： 1.检测各组miR-3162-3P、CTNNB1-mRNA、β-catenin蛋白水平，观察其与哮喘发病的关系。 2.系统比较儿童哮喘患者与正常儿童，哮喘不同分级／不同分期周围血中miR-3162-3P水平及靶基因 CTNNB1-mRNA、β-catenin蛋白的表达，探讨其在哮喘诊断／临床分期分级和预测哮喘治疗效果等方面的价值。 【方法】 1．以4～15岁儿童哮喘为研究对象，以全国儿童哮喘防治指南中哮喘定义为标准，签署知情同意书，采集全血4ml，收集健康儿童50例，收集哮喘病人共58例，其中新发哮喘患者（未使用激素治疗）22例，已确诊哮喘患者（已规律使用激素治疗）36例，其中已经确诊组根据哮喘的控制状态分未控制3例，部分控制17例，控制16例。 2. Trizol法提取血清RNA，检测总RNA，用miRNA逆转录试剂盒进行逆转录，按照RT-qPCR技术检测miR-3162-3P水平改变。 3.萃取细胞中的RNA，检测外周血总RNA，用mRNA逆转录试剂进行逆转录，RT-PCR技术检测CTNNB1的基因水平。 4. Elisa法检测血清β-catenin水平。 【结果】 1.哮喘组病人 miR-3162-3P表达显著升高于健康对照组，差别具有统计学意义（P<0.05）；除未控制组外，哮喘各组miR-3162-3P表达显著高于健康对照组，差别具有统计学意义（分别P＜0.05）；哮喘各组中，新发病例组miR-3162-3P表达高于控制组，部分控制组，未控制组，差别有统计学意义（分别P＜0.05）；部分控制组较控制组表达增高，差别具有统计学意义（P＜0.05）。 2.哮喘组病人CTNNB1-mRNA表达显著低于健康对照组，差别具有统计学意义（P＜0.05）；除未控制组外，哮喘各组CTNNB1-mRNA表达较健康对照组下降，差别具有统计学意义（分别 P＜0.05）；除未控制组外，新发病例组CTNNB1-mRNA表达较控制组，部分控制下降，差别具有统计学意义（分别 P＜0.05）；部分控制组较控制表达下降，差别具有统计学意义（P＜0.05）。 3.哮喘组病人β-cateni n水平较健康对照组明显下降，差别具有统计学意义（P＜0.05）；除未控制组外，哮喘各组β-catenin水平较健康对照组下降，差别具有统计学意义（分别 P＜0.05）；除未控制组外，新发病例组β-catenin水平较控制组，部分控制组下降，差别具统计学意义（分别P＜0.05）；部分控制组β-catenin水平较控制组下降，差别具有统计学意义（P＜0.05）。 【结论】 1.miR-3162-3P在哮喘病人中表达显著增高，其参与调控CTNNB1靶蛋白，导致β-catenin蛋白水平的下降，提示miR-3162-3P与哮喘发病高度相关。 2.规律吸入激素治疗的哮喘病人miR-3162-3P表达受抑制，β-cateni n蛋白水平回升，提示糖皮质激素可能通过抑制miR-3162-3P/β-catenin通路，影响哮喘炎症的发展。 3.经规律吸入激素治疗后，哮喘病人miR-3162-3P表达受抑制，导致β-cateni n蛋白水平上调，与临床控制水平大致呈负相关。
哮喘;周围血MiR-3162-3P;CTNNB1蛋白;β-catenin蛋白;临床诊断
广东医科大学
硕士
儿科学
谭建新
2017
中文
R725.6;R562.25
46
2018-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）