PDTC对人结肠癌HCT116细胞增殖,侵袭,凋亡的影响
【目的】 研究通过体外培养结肠癌细胞 HCT116，经抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）诱导，探讨PDTC对人结肠癌HCT116细胞增殖,侵袭,凋亡方面的影响并探讨PDTC对人结肠癌HCT116细胞NF-κB,MMP9蛋白的表达和NF-κB活性的影响。了解PDTC体外抗结肠癌作用及其机制，为PDTC在结肠癌的治疗提供相关实验基础及理论依据。 【方法】 1．使用四甲基偶氮哇蓝(MTT)法检测不同浓度PDTC对HCT-116细胞生长抑制的影响。 2．通过Transwell小室侵袭实验检测不同浓度PDTC对HCT-116细胞侵袭能力的影响。 3．通过流式细胞仪检测不同浓度PDTC作用于HCT-116细胞后的细胞凋亡率。 4．采用Western印迹法测定不同浓度PDTC作用于HCT-116细胞后NF-κB,MMP9蛋白的表达的影响。 【结果】 1．浓度分别为10μmol/l、50μmol/l、100μmol/l的PDTC作用于HCT-116细胞12h、24h、36h后均明显抑制该细胞的增殖，和对照组相比差异有显著性(P<0.01)，并且有时间、剂量上的依赖性。 2．Transwell小室侵袭实验结果显示PDTC处理组可以明显抑制HCT-116细胞的增殖(P<0.05)。各个处理组之间两两相互比较,除PDTC中剂量组(P2)与PDTC高剂量组(P3)之间没有统计学意义的差异外(P>0.05)，剩下不同组之间两两相互比较均有显著性的差异(P<0.05)。 3.通过流式细胞仪检测PDTC浓度分别为10μmol/l、50μmol/l、100μmol/l的PDTC诱导HCT-116细胞24小时后，细胞凋亡率分别为3.23％、7.13％和16.07％，与生理盐水对照组比较以及各浓度组之间相互比较差异均具有显著性(P<0.01)。 4.采用 Western印迹法检测浓度分别为10μmol/l、50μmol/l、100μmol/l的PDTC诱导HCT-116细胞24小时后，结果显示，和对照组比较不同浓度PDTC处理后 MMP9蛋白表达水平下降,其差异具有统计学意义(P<0.05)，并且随着PDTC浓度的增加，MMP9蛋白表达水平下降越明显，各实验处理组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。 5.采用 Western印迹法检测浓度分别为10μmol/l、50μmol/l、100μmol/l的PDTC诱导HCT-116细胞24小时后，结果显示，和对照组比较，不同浓度PDTC处理后 NF-κB蛋白表达水平下降，其差异具有统计学意义(P<0.05)，并且随着PDTC浓度的增加，MMP9蛋白表达水平下降越明显，各实验处理组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。 【结论】 PDTC可以有效抑制结肠癌HCT-116细胞的增殖、侵袭、诱导凋亡，可能的机制是PDTC通过抑制了MMP9蛋白及NF-κB的表达，以及抑制NF-κB有关。
吡咯烷二硫氨基甲酸;结肠癌;HCT116细胞;NF-κB蛋白
广东医科大学
硕士
外科学
方永平
2017
中文
R735.35
46
2018-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）