抵抗素与血管平滑肌细胞增殖、迁移及表型标志蛋白表达水平的相关性研究
【目的】 1.观察不同浓度抵抗素在人血管平滑肌细胞增殖中的作用。 2.探讨抵抗素对人血管平滑肌细胞增殖、迁移、表型标志蛋白表达的影响。 3.探讨抵抗素对人血管平滑肌细胞作用中与ERK通路的关系。 【方法】 1.复苏冻存的动脉平滑肌细胞，采用组织贴壁法培养。 2.选择细胞形态好、相同代数的第4~7代 VSMCs，加入抵抗素或抵抗素＋PD98059分别用 CCK-8法、Transwell法、Western blot检测 VSMCs增殖、迁移能力、表型标志性蛋白表达水平的作用。 【结果】 1.经组织贴壁法成功复苏原代培养后冻存的动脉平滑肌细胞。 2.在细胞培养中添加不同浓度的抵抗素，经CCK-8法检测到的 OD值随抵抗素浓度升高而增加（P<0.05）；添加ERK阻断剂 PD98059能明显阻滞抵抗素诱导的平滑肌细胞增殖作用（P<0.05）。 3. Transwell迁移小室实验发现，抵抗素（100ng/ml）处理 VSMCs后，细胞迁移率显著增加；添加PD98059后则明显减少了抵抗素诱导的 VSMCs迁移。 4.与空白对照组相比，Western blot结果显示，抵抗素处理后平滑肌细胞收缩表型标志蛋白（α-SM-Actin）含量下降（P<0.05）,增殖型蛋白（OPN）含量升高（P<0.05）；与抵抗素处理组相比，阻断ERK通路后，α-SM-Actin含量升高（P<0.05）,增殖型蛋白 OPN含量下降（P<0.05）。 【结论】 1.复苏经原代培养后冻存、冻存时间较长（约6个月）的动脉平滑肌细胞，组织贴壁法培养及传代具有复苏成功率高、操作简单的特点。 2.抵抗素能诱导VSMCs增殖、迁移能力增强，随抵抗素浓度升高，VSMCs增殖能力有递增的趋势。 3.抵抗素能影响动脉平滑肌细胞表型标志蛋白表达水平，收缩型蛋白表达减少，增殖型蛋白表达增多。 4.通过阻断 ERK通路，抵抗素诱导的 VSMCs增殖以及迁移作用明显减弱、VSMCs由增殖型向收缩型转变。表明抵抗素可能是通过ERK通路对ASO的发生发展起作用。
抵抗素;血管平滑肌细胞;动脉硬化;ERK通路;细胞增殖;细胞迁移
广东医科大学
硕士
外科学(血管外科)
陈小东
2017
中文
R543
42
2018-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）