冻存的浓缩生长因子血浆膜促进慢性创面愈合的临床研究
第一部分不同冻存期浓缩生长因子凝胶膜活性成分的变化分析 【目的】 通过研究不同冻存期浓缩生长因子（concentrated growth factors，CGF）凝胶膜内血清血管内皮生长因子(VEGF)、血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及表皮细胞生长因子（EGF）含量的变化情况，以评价冻存保存的有效性、可行性。 【方法】 1.研究对象及纳入标准 征集10名健康志愿者，3名男性7名女性，平均年龄28.3+6.2周岁，身体健康，无传染病，无系统性疾病，采血前3个月未服用任何抗血小板药物如阿司匹林等，采血前1周戒烟酒。知情同意采血用于本实验。 2.CGF的制备与保存 以CGF专用采血管采取受试者自体静脉血4管，对称放置入我科MEDIFUGE CGF离心机，设定制备CGF程序，约400g的离心力下离心12min，取位于上层血浆和下层红细胞之间的淡黄色凝块就是CGF，以专用压膜具压制成CGF凝胶膜，观察组3管以凡士林纱布包裹置于储物器皿，后贮存于-80℃冰箱中保存，备用。 3.检测不同冻存期CGF活性成分的变化 对照组立即测定生长因子浓度。观察组分别于15d、30d、60d取出，置入37℃恒温水浴箱中轻轻摇晃解冻3min，解冻完成后装入5ml干燥离心管中，加入3mlPBS液浸没标本后放入4℃冰箱，浸泡2h后离心，收集上清液，测定生长因子浓度。 4.统计分析 实验结果采用GraphPad Prism6建立数据库作图并分析，全部计量资料均用均数±标准差（x±s）表示。显著性检验配对资料对比采用配对t检验，多个样本均数间两两比较采用q检验，多个样本均数比较应用方差分析。检验标准取P<0.05表示差异具有统计学意义。 【结果】 1.大体标本形态学特征 冰冻前CGF膜为乳白色，半透明状，质韧富于弹性，表面光滑有亮泽；冻后CGF膜亦为半透明状，略微收缩，总体积大小无明显改变，但韧性减弱，脆性增加，易破损。 2.不同冻存期CGF膜中VEGF,IGF-1,EGF,TGF-β1浓度比较 VEGF,IGF-1,EGF,TGF-β1浓度平均OD值,四组之间均无显著性差异(P＞0.05);各组浓度的OD值从高到低均依次为:冻存15d组、新鲜组、冻存30d组、冻存60d组。 【结论】 1.冻存前和冻存后15d、30d、60d的CGF膜内，VEGF,IGF-1,EGF,TGF-β1依然有阳性表达，且浓度对比差异并无统计学意义，故冻存后的CGF亦拥有促进组织修复的生物学特性，低温冻存CGF膜是可行的。 2.冻后CGF膜脆性增强，弹性减弱，因此冷冻对其三维网状结构的影响情况尚需进一步实验研究。 第二部分冻存的浓缩生长因子凝胶膜促进慢性创面愈合的疗效观察 【目的】 评价冻存的浓缩生长因子凝胶膜对于慢性难愈合创面愈合的治疗作用，探索治疗慢性难愈合创面的新方法，为临床治疗慢性难愈合创面提供依据和参考。 【方法】 1.研究对象及纳入标准 自广东医科大学附属深圳龙华区中心医院选取35例符合入组标准的慢性难愈合创面患者作为研究对象，其中男25例，女10例；年龄20~90周岁，慢性创面共40处。纳入标准:（1）无严重心、肺、肝、肾、血液等系统性疾病患者；（2）无严重并发症及全身感染；（3）无贫血及低蛋白血症等营养不良型患者；（4）创面的深度及范围由两位高年资医师共同鉴定，决定选取创面大小＜25cm2；（5）符合慢性难愈合创面诊断标准的、如糖尿病性溃疡、创伤及压迫性溃疡等。 2.实验分组 按性别、年龄、病情搭配的原则随机分组。临床实验设计为随机单盲对照研究。 3.CGF的制备 同第一部分。 4.临床实验 4.1所有患者入院后，均进行简单的清创处理，并给予抗炎、活血及营养支持等常规治疗。糖尿病患者严格控制血糖。 4.2实验分为2组：对照组患者在清创处理后，常规使用重组牛成纤维细胞生长因子凝胶及复方多粘菌素B软膏涂抹创面，无菌纱布覆盖包扎，换药1次／d，直至创面完全愈合；实验组患者常规治疗后行扩创处理，扩创术后彻底止血，再于创面基底给予自体冻存的CGF，换药3-5日/次，直至创面完全愈合。 5.疗效的评估 记录并评估各项相关指标1）换药次数；2）采用激光多普勒血流灌注成像仪测定创面血液灌流值，评价血运情况；3）创面收缩情况采用数码照相后，予图像处理软件测量创面的愈合面积（愈合率=创面愈合面积/创面总面积*100%）；4）观察患者舒适度；5）观察不同治疗期创面的愈合率。6）观察患者在治疗期间不良反应的发生情况；7）随访观察评估愈合后瘢痕生长情况。 6.统计分析 Microsoft Excel处理数据并软件作图,采用SPSS16.0软件进行统计学分析。全部计量资料均用均数±标准差(x±s）表示，两样本均数的比较用配对资料的秩和检验,检验水准取P<0.05表示差异具有统计学意义。 【结果】 1.综合疗效两组比较 B组（观察组）治疗有效创面数18例（90％），A组（对照组）有效创面数15例（75％），观察组治疗有效率高于对照组，差距具有统计学意义。 2.两组创面疼痛情况两组创面疼痛评分在治疗前差异无统计学意义，治疗后2周创面疼痛评分B组低于A组，差异有统计学意义。 3.两组创面微循环比较两组创面血流灌注值在治疗后1、2周，B组均高于A组，差异有统计学意义。 4.愈合后瘢痕增生情况治疗2月后，B组患者瘢痕评分低于 A组，差异有统计学意义。 【结论】 1．冻存的CGF凝胶膜能有效促进慢性创面的愈合，为临床治疗慢性创面提供依据和参考。 2．由于临床实验样本量较小，无法体现实验结果的科学性和客观性，因此CGF治疗慢性创面的相关机制和效果还需进一步研究。
浓缩生长因子凝胶膜;冰冻保存;活性成分;慢性创面愈合;临床疗效
广东医科大学
硕士
外科学(整形外科)
柯昌能
2017
中文
R619.9
56
2018-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）