维生素C促进高糖环境下人脂肪干细胞增殖的机制研究
【目的】 研究维生素C（vitaminC;VC）对高糖环境下人脂肪干细胞（human Adipose Derived Stem Cells;hADSCs）增殖的影响及其机制；探讨VC在hADSCs促进糖尿病病人创面修复中的作用。 【方法】 1.取健康人的腹壁脂肪，利用组织块贴壁法分离培养hADSCs，并通过检测细胞表面标志物、诱导成脂成骨分化鉴定hADSCs； 2.模拟糖尿病人体内的高糖环境，在25 mM的高糖环境下培养hADSCs，4周以后观察细胞形态变化； 3.用200μM的VC作用高糖培养4周后的hADSCs，检测其增殖的情况； 4.通过流式细胞术、EdU及Western Blotting验证VC影响hADSCs增殖的相关分子机制。 【结果】 1. hADSCs鉴定：流式细胞仪检测：CD105、CD29、CD13和CD44呈阳性表达，而CD31、CD34和CD106呈阴性表达；成脂分化：诱导14 d后，胞内有脂滴形成，油红O染色呈阳性；成骨分化：诱导21 d后，茜素红染色呈阳性。 2.25 mM高糖状态下培养4周以后的细胞，其形态大小不一，排列杂乱无章，胞形宽大，胞质粗糙，折光性较差，培养液中细胞碎片较多，细胞增殖缓慢。 3. VC对于高糖处理后的hADSCs的增殖有促进作用，并呈剂量和时间依赖性。当VC浓度为200μM时，细胞增殖的能力最强；且当作用时间为48 h时增殖效果比较明显。 4. EdU检测结果显示：在200μM VC作用48 h后EdU阳性率明显升高；而使用 ERK/MAPK通路抑制剂 U0126后， EdU阳性率又显著降低，而含有PI3K/AKT通路抑制剂LY294002的细胞却未见明显变化。Western blotting结果显示：VC作用后的hADSCs其ERK及p-ERK的表达水平明显高于对照组；而AKT/p-AKT、p38/p-p38表达水平却未见明显不同。 5.流式细胞仪检测显示：与VC组相比，HG组和U0126组S期占细胞周期比例显著减少。Western blotting结果表明：VC组细胞周期调节蛋白cyclinE跟CDK-2表达量明显较HG组高，而使用通路抑制剂U0126后又显著降低。p53及p21的表达VC组较HG组低。 6.流式细胞仪检测胞内ROS，VC组内ROS的含量较HG组明显减少。 【结论】 VC通过激活ERK/MAPK信号通路影响细胞周期，同时降低细胞因高糖环境诱导而发生的过度氧化应激，从而促进细胞增殖。
脂肪干细胞;高糖环境;维生素C;ERK/MAPK信号通路;细胞增殖;创面修复;分子机制
广东医科大学
硕士
外科学(整形外科)
张培华
2017
中文
R619.9
62
2018-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）