牛蒡子中木脂素类成分抑制人前列腺癌PC3细胞增殖及其机理研究
目的： 研究牛蒡子苷（Arctiin）、牛蒡子苷元（Arctigenin）及牛蒡酚F（Lappaol F）对人前列腺癌PC3细胞增殖的影响，并探讨其相关机制。 方法： 采用不同浓度的Arctiin、Arctigenin及Lappaol F作用于PC3细胞，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测对细胞增殖的影响；瑞姬氏染色观察用药前后细胞形态变化；Annexin-V FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡或坏死情况；PI单染-流式检测法检测不同浓度下的三种药物对细胞生长周期的影响；Western-blot法检测凋亡相关蛋白bcl-2、Bax和Caspase3的表达情况。 结果： （1）Arctiin（0.313-20μmol/L）、Arctigenin（0.313-20μmol/L）及Lappaol F（20-120μmol/L）均能显著抑制PC3细胞的增殖，此抑制作用均具有时间和浓度依赖性 （2）瑞姬氏染色结果显示：Arctiin（5μmol/L）或Arctigenin（5μmol/L）作用细胞48h，部分细胞胞膜回缩，细胞质减少，胞膜紧贴胞核，胞液纤维网状结构；Lappaol F（100μmol/L）作用细胞48h，部分细胞体积缩小，细胞质凝聚，细胞膜固缩并伴有出芽。 （3）Annexin-V FITC/PI双染结合流式细胞术检测发现：与空白对照组比较Arctiin（1.25-20μmol/L）或Arctigenin（0.625-20μmol/L）均可显著增加Annexin-V FITC/PI双染阳性率（P<0.01或P<0.05），PI单染阳性率在高浓度组（Arctiin5-20μmol/L或Arctigenin2.5-20μmol/L）时也显著增加（P<0.01），但Annexin-V FITC单染阳性率均无明显变化，说明Arctiin和Arctigenin并未诱导PC3细胞发生凋亡，而是诱导其发生了坏死；与空白对照组比较，Lappaol F可显著增加FITC单染阳性率（P<0.01），即细胞早期凋亡率，说明Lappaol F可诱导PC3细胞发生凋亡。 （4）细胞周期检测结果显示：Arctiin和Arctigenin均能不能程度的升高细胞的S期比例，同时降低G0/G1期比例，但是降低或升高的比例较小，Sub G1峰的比例（Sub G1/%）与对照组比较并无明显变化，均低于3%，这一结果同前面流式细胞术检测凋亡的结果相一致，即更进一步证实，Arctiin或Arctigenin诱导PC3细胞死亡的方式是非凋亡性的，同时也提示提示Arctiin和Arctigenin并不是以细胞周期为靶点，通过干扰细胞周期来抑制PC3细胞增殖，其细胞毒性亦与细胞周期没有很大的关系；不同浓度的Lappaol F均能不同程度的升高细胞G2/M期比例，此作用并不完全依赖于药物浓度大小，这一结果提示，Lappaol F阻滞细胞周期于G2/M期，抑制了细胞的分裂，导致细胞增殖减慢。同时Lappaol F作用的组与空白对照组比较Sub G1峰所占的比例随着药物浓度的增加均不同程度升高，说明细胞凋亡的比例均有不同程度升高，更进一步证实了Lappaol F诱导PC3细胞死亡的方式是细胞凋亡。 （5）Werstern-blot分析显示，Arctiin或Arctigenin作用细胞48h时，可显著降低bcl-2表达水平（P<0.01），但对Bax和Caspase-3蛋白的表达无明显影响（P>0.05）。不同浓度的Lappaol F作用细胞48h，bcl-2表达水平显著降低（P<0.01），同时 Bax的表达水平显著升高（P<0.01），但对Caspase3的表达无明显影响（P>0.05）。 结论： Arctiin或Arctigenin均能显著抑制体外PC3细胞增殖，并呈现出一定的剂量效应，时间效应关系。Arctiin或Arctigenin诱导PC3细胞死亡的方式以坏死为主，这一作用可能与其能够下调bcl-2的表达相关，但对细胞周期阻滞作用并不明显，提示Arctiin或Arctigenin并不是以细胞周期为靶点，通过干扰细胞周期来抑制PC3细胞增殖，其细胞毒性亦与细胞周期没有很大的关系。 Lappaol F能显著抑制体外PC3细胞增殖，并呈现出一定的剂量效应，时间效应关系。Lappaol F可诱导PC3细胞发生凋亡，这一作用与其可以下调bcl-2表达，同时上调Bax的表达相关，并且也能将细胞周期阻滞于G2/M期，抑制了细胞的分裂，进而进一步阻滞了细胞增殖。
牛蒡子;木脂素类成分;前列腺癌;PC3细胞;细胞增殖
广州中医药大学
硕士
中医临床基础
杨瑞仪
2013
中文
R737.25;R730.52
55
2018-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）