人不同牙源性干细胞中差异表达miRNAs谱及靶基因功能分析
目的：比较人牙髓干细胞（Dental Pulp Stem Cells，DPSCs）与根尖牙乳头干细胞（Stem Cells from the Apical Papilla,SCAP）、根尖牙乳头干细胞与根尖牙乳头非干细胞中 miRNAs的差异表达情况，研究差异表达 miRNAs的靶基因并对其功能进行预测分析，探讨miRNAs在干性维持方面的作用。 方法：采用酶消化法获得原代人牙髓细胞和根尖牙乳头细胞，鼠抗人STRO-1单克隆抗体标记，利用免疫磁珠分选获得DPSCs、SCAP、非SCAP。将分选获得的细胞进行成骨样和成脂样细胞诱导分化，用ALP、茜素红染色和油红O染色的方法鉴定其分化能力，确定干细胞干性。采用高通量的二代测序技术，检测DPSCs和SCAP、SCAP和非SCAP中miRNAs的表达情况，筛选差异表达的miRNAs，运用生物信息学方法对差异表达miRNAs进行靶基因预测和功能分析。 结果： （1）与DPSCs相比，SCAP中表达下调超过1.5倍（P＜0.05）的miRNAs有7个，分别是 hsa-miR-224-5p、hsa-miR-1247-5p、hsa-miR-3065-3p、hsa-miR-452-5p、hsa-miR-767-5p、hsa-miR-4284、hsa-miR-146a-5p，无表达上调的miRNAs。这些表达下调的miRNAs所调控的下游靶基因主要有26个，这些靶基因可能参与了细胞的迁移、分化和凋亡。 （2）与非SCAP相比，SCAP中表达下调超过1.5倍（P＜0.05）的miRNAs有13个，分别是hsa-miR-4532、hsa-miR-6131、hsa-miR-4284、hsa-miR-3182、hsa-miR-1273e、hsa-miR-7-1-3p、hsa-miR-31-3p、hsa-miR-3654、hsa-miR-495-3p、hsa-miR-382-3p、hsa-miR-605-3p、hsa-miR-3195、hsa-miR-99a-5p），表达上调的miRNAs有12个，分别是hsa-miR-4508、hsa-miR-1247-5p、hsa-miR-6819-3p、hsa-miR-2116-3p、hsa-miR-490-5p、hsa-miR-335-5p、hsa-miR-1914-5p、hsa-miR-1249、hsa-miR-3180-3p、hsa-miR-668-3p、hsa-miR-210-5p、hsa-miR-23a-5p）。这些差异表达miRNAs所调控的下游靶基因主要有26个（表达下调的miRNAs所调控的有20个，表达上调的miRNAs所调控的有6个），这些靶基因可能参与了细胞的自我更新、分化和迁移。 结论： （1）在DPSCs和SCAP中，特定miRNAs表达的下调以及其所调控的下游靶基因可能与SCAP的干性维持相关。 （2）在SCAP和非SCAP中，差异表达miRNAs调控的下游靶基因及其基因功能与SCAP的干性维持密切相关。
牙源性干细胞;miRNAs谱;靶基因功能;分化能力
福建医科大学
硕士
口腔基础医学
吕红兵
2017
中文
R392
61
2018-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）