高糖调节MC3T3-E1细胞雌激素受体功能研究
目的： 本实验室前期发现高糖和雌激素可通过β-catenin途径调节骨形成功能。由于现有部分报道提示ER和β-catenin在成骨细胞发挥协同作用，因此，本研究的目的是，观察高糖和雌激素对成骨细胞ER表达的调节及其与β-catenin的相互作用。 方法： 采用Western-blot方法，观察不同浓度、时程高糖对成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞ERα和ERβ蛋白表达。选择适宜浓度与时程，观察高糖与雌激素单独或联合时对ER蛋白表达、分布和转录活性的影响。ER分布采用免疫荧光法，ER转录活性采用双荧光素酶报告基因检测方法。同时，还采用MTT、茜素红染色的方法检测高糖与雌激素对成骨细胞增殖、矿化活性的影响。采用LiCl抑制β-catenin降解，观察LiCl对高糖所致ER功能的影响。 结果： 雌激素受体的蛋白表达水平随着葡萄糖浓度的升高呈剂量依赖性升高趋势；在33mmol/L高糖培养下加入雌二醇，雌激素受体表达水平较雌激素组反而呈降低趋势。免疫荧光实验结果显示：高糖组（33mmol/L）和雌二醇组细胞雌激素受体较正常组（5.5mmol/L）表达增加，且核内分布高，而高糖联合雌二醇共同作用后，受体数量和入核较高糖或雌二醇组更低。荧光素酶报告基因实验结果显示：雌激素受体转录活性在高糖诱导下呈降低趋势，雌二醇组可升高ER转录活性，高糖组加入雌二醇后，其转录活性较雌二醇作用组呈降低趋势。根据MTT、茜素红染色结果显示：高糖（33mmol/L）诱导后，MC3T3-E1细胞活性及矿化能力都受到抑制，而高糖与雌二醇共同作用后，MC3T3-E1细胞活性及矿化能力较雌二醇组呈抑制趋势。加入高糖（33mmol/L）与LiCl(5mmol/L)共同作用后，ER表达水平较高糖组显著性降低。而LiCl可以升高高糖诱导下的ER转录活性。 结论： 1.高糖可上调ER蛋白表达，同时可下调ER转录活性，后者可能与β-catenin表达有关。 2.雌激素可上调ER蛋白表达和转录活性，这些作用可在高糖情况下被取消。
高糖;雌激素;成骨细胞;雌激素受体;β-连环蛋白
南昌大学;南昌大学医学院
硕士
药学
彭维杰
2017
中文
R329.2
52
2018-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）