CD4+T细胞亚群转录因子及炎症因子的DNA甲基化水平在Vogt-小柳原田综合征和Behcet病中的研究
背景： 葡萄膜炎是一类常见的眼内炎症性疾病，主要累及葡萄膜，视网膜，视网膜血管及玻璃体，是我国重要的致盲眼病。Vogt-小柳原田综合征（Vogt-Koyanagi-Harada syndrome,VKH）和白塞氏病（Behcet’s disease,BD）是亚洲人群中两种常见的葡萄膜炎类型。VKH综合征是一种多系统受累的自身免疫性疾病，临床改变以双侧肉芽肿性全葡萄膜炎为特征，并伴有其他系统的损害，如白癜风，听力和神经系统受损等。Behcet病是一种自身炎症性疾病，临床表现以反复发生的葡萄膜炎，口腔溃疡，生殖器溃疡以及皮肤损害为特征。目前治疗葡萄膜炎的主要药物仍为糖皮质激素和免疫抑制剂。 表观遗传修饰主要包括3种调节机制：DNA甲基化、组蛋白修饰和RNA相关沉默。DNA甲基化是表观遗传修饰的重要机制之一，其在不改变基因序列的情况下调控基因的功能，并能将此基因功能遗传给后代。已有研究表明DNA甲基化参与调控免疫反应以及T细胞亚群分化过程中细胞因子的表达。早期研究报道，在初始CD4+T细胞分化为Th1细胞时，IFN-γ表达上调与其启动子区甲基化水平降低有关，并且IL-4表达沉默与GATA3和IL-4的甲基化密切相关。近年来，表观遗传学改变在自身免疫性疾病中的作用越来越受到大家的关注，一系列研究表明，T细胞DNA甲基化的异常与某些自身免疫性疾病相关。 虽然葡萄膜炎的发病机制目前还不完全清楚，但越来越多的研究表明T细胞介导的免疫反应在VKH综合征和Behcet病的发病过程中发挥着重要作用。很多研究表明Th1,Th2,Th17和Treg细胞分泌的细胞因子表达异常以及这四种Th细胞亚群的频率异常在葡萄膜炎发生中起重要作用。研究表明活动性VKH患者和BD患者体内IFN-γ,IL-17A,TBX21,RORγt表达异常，提示T细胞亚群的免疫功能失调参与葡萄膜炎的发生发展。 基于以上研究背景，我们提出以下问题：CD4+T细胞亚群的转录因子及炎症因子启动子区甲基化水平与VKH综合征和Behcet病的发生是否存在相关性？ 第一部分、CD4+T细胞亚群转录因子及炎症因子的DNA甲基化水平在Vogt-小柳原田综合征中的研究 目的： 在本研究中，我们探讨CD4+T细胞亚群的转录因子及炎症因子(TBX21,GATA3,RORγt,FOXP3,IFN-γ,IL-4,IL-17A和TGF-β)启动子区甲基化在VKH综合征的发生发展中的作用。 方法： 1.利用Sequenom MassARRAY系统检测VKH患者和健康对照CD4+T细胞亚群转录因子和炎症因子启动子区DNA甲基化水平。 2.利用荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测VKH患者和健康对照CD4+T细胞中GATA3,TGF-β和IL-4 mRNA表达水平。 3.利用相关性分析的方法，分析GATA3,TGF-β和IL-4启动子区DNA甲基化水平与其相应的mRNA表达的关系。 结果： 1.与正常对照相比，GATA3,TGF-β和IL-4基因启动子区甲基化水平在活动期VKH患者CD4+T细胞中中显著升高（P＜0.05）。 2.活动期VKH患者CD4+T细胞中GATA3和TGF-β基因mRNA表达水平显著降低，且与其相应的甲基化水平呈负相关关系。 3.与活动期VKH患者相比，静止期VKH患者体内GATA3和TGF-β基因启动子区甲基化水平显著降低且其mRNA表达水平显著升高。 结论： 在本研究中，我们发现活动期VKH患者CD4+T细胞中GATA3和TGF-β启动子区甲基化水平显著升高，影响其mRNA表达水平下降，进而参与VKH综合征的发生发展。环孢素和激素的药物治疗可能通过降低VKH患者体内GATA3和TGF-β启动子区甲基化水平，进而调节其mRNA表达，从而达到治疗效果。 第二部分、CD4+T细胞亚群转录因子及炎症因子的DNA甲基化水平在Behcet病中的研究 目的： 为了探讨CD4+T细胞亚群的转录因子及炎症因子(TBX21,GATA3,RORγt,FOXP3,IFN-γ,IL-4,IL-17A和TGF-β)启动子区甲基化与Behcet病的关系。 方法： 1.利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）定量检测Behcet病患者和健康对照CD4+T细胞TBX21,GATA3,RORγt,FOXP3,IFN-γ,IL-4,IL-17A和TGF-β启动子区DNA甲基化水平。 2.利用荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测Behcet病患者和健康对照CD4+T细胞内GATA3,TGF-β和IL-4 mRNA表达水平。 3.利用Pearson相关性分析的方法，分析GATA3,TGF-β和IL-4启动子区DNA甲基化水平与其相应的mRNA表达的关系。 结果： 1.活动期Behcet病患者体内GATA3,TGF-β和IL-4启动子区甲基化水平比健康对照显著升高（P＜0.05）。 2.GATA3和TGF-β的mRNA表达水平在活动期Behcet病患者中显著降低且与其相应的甲基化水平呈负性关系。 3.静止期Behcet病患者体内GATA3和TGF-β启动子区甲基化水平比活动期BD患者显著降低。 结论： 我们的研究发现，CD4+T细胞中GATA3和TGF-β启动子区高甲基化与中国汉族人群BD的易感性相关。
小柳原田综合征;肠型白塞氏病;T细胞亚群;炎症因子;DNA甲基化;表观遗传学
重庆医科大学
硕士
眼科学
杨培增
2017
中文
R773.9
60
2018-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）