痫性放电神经元微环境对少突胶质前体细胞分化的影响
第一部分无镁外液诱导神经元痫性放电后微环境的变化及其对少突胶质前体细胞分化的影响 目的： 探讨正常神经元微环境及痫性放电神经元微环境对少突胶质前体细胞（oligodendrocyte precursor cell，OPC）分化的作用，从体外水平了解痫性放电对髓鞘再生的影响。 方法： 收集无镁细胞外液诱导神经元痫性放电后1h、2h、4h、6h、12h、24h、48h、72h的培养基，并以正常细胞外液孵育后相同时间点的培养基为对照，高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）检测各个时间点两组培养基中谷氨酸浓度；OPC纯化后增殖2-3天后进行分化，根据分化时加入的神经元培养基占总培养基体积的比例分为3个层次：1/8浓度、1/4浓度、1/2浓度，每个层次再分为三组：OPC分化培养基（ODM）组、OPC分化培养基+相应浓度诱导后神经元培养基（ODM+INM）组、OPC分化培养基+相应浓度正常神经元培养基（ODM+NNM）组，采用RT-qPCR检测OPC分化第3天、5天、7天髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein，MBP）mRNA水平的相对量的差异。实验重复3次。 结果： HPLC检测发现，神经元痫性放电后72h的培养基中谷氨酸浓度（91.79±0.230μM），明显高于正常神经元生长培养基（90.71±0.478μM）（P＜0.05）；加入1/2浓度的正常和异常神经元培养基对OPC分化产生不同的影响，ODM+1/2NNM组MBP转录水平在分化第3天、第5天显著高于ODM组（P＜0.05），在分化第7天显著低于ODM组（P＜0.05）；ODM+1/2INM组 MBP转录水平在分化第3天显著高于ODM+1/2NNM组（P＜0.05），在分化第5天、第7天显著低于ODM+1/2NNM组（P＜0.05）。 结论： 神经元微环境对OPC分化有重要的影响作用，正常神经元微环境可以促进OPC的分化，而无镁诱导神经元痫性放电后的微环境会抑制OPC的分化。 第二部分 AMPA受体介导痫性放电神经元微环境中谷氨酸对少突胶质前体细胞分化的影响 目的： 探索α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异戊唑丙酸（α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoazolepropionic acid，AMPA）受体是否介导谷氨酸对OPC分化的影响。 方法： 根据OPC分化的微环境成分进行分组：正常对照组（正常神经元微环境）、谷氨酸组（正常神经元微环境中添加谷氨酸）、AMPA受体拮抗剂组（痫性放电神经元微环境中添加AMPA受体拮抗剂）、痫性放电组（痫性放电神经元微环境），采用 RT-qPCR、免疫荧光、WesternBoltting检测各组 MBP表达情况，并采用免疫荧光检测各组AMPA受体GluR2亚基荧光强度。实验重复3次。 结果： 通过采用RT-qPCR、免疫荧光、WesternBoltting对MBP表达量进行检测，发现正常对照组明显高于谷氨酸组、痫性放电组（P＜0.05）；痫性放电组明显低于 AMPA受体拮抗剂组（P＜0.05）。采用免疫荧光检测GluR2亚基荧光强度，发现正常对照组明显低于谷氨酸组、痫性放电组（P＜0.05）；痫性放电组明显高于AMPA受体拮抗剂组（P＜0.05）。 结论： 痫性放电神经元较正常神经元释放更多的谷氨酸，通过作用于AMPA受体，抑制OPC分化，推测可能由于少突胶质系细胞上的GluR2亚基表达上调，导致细胞内钙离子内流减少，从而出现OPC分化受阻的现象。
痫性放电神经元;少突胶质前体细胞;微环境;髓鞘再生;细胞分化
重庆医科大学
硕士
儿科学(神经病学)
蒋莉
2016
中文
R742.1
70
2018-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）